2) наличии галактоманнана
3) наличии у некоторых бактерий миколовых кислот
4) эффекте смещения длины волны
Окраска по Нейссеру является дифференциальным методом, выявляющим метахроматические зерна волютина — внутриклеточные включения, состоящие преимущественно из полифосфатов. Особенно характерны эти зерна для коринебактерий, прежде всего Corynebacterium diphtheriae, где они располагаются обычно на полюсах клетки и называются зернами Бабеша—Эрнста. При окрашивании они приобретают темно-сине-фиолетовую или почти черную окраску, тогда как тело бактерии окрашивается в более светлый желтовато-коричневый цвет.
Контраст между зернами и цитоплазмой позволяет распознать полярную зернистость и способствует предварительной идентификации коринебактерий. Обнаружение волютина не является самостоятельным доказательством токсигенности C. diphtheriae: для подтверждения вида и способности продуцировать дифтерийный токсин необходимы культуральные, биохимические и молекулярные методы, включая выявление гена tox или определение продукции токсина.
Миколовые кислоты имеют диагностическое значение при кислотоустойчивой окраске микобактерий, а галактоманнан относится преимущественно к компонентам клеточной стенки грибов и используется в иных диагностических подходах. Смещение спектральных характеристик красителя лежит в основе явления метахромазии, однако непосредственным объектом выявления при окраске по Нейссеру являются именно зерна волютина.
| Объект или признак | Результат при окраске по Нейссеру | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Зерна волютина | Темно-синие, фиолетовые или почти черные включения | Основной критерий дифференциации; выявляют метахроматическую зернистость |
| Химическая природа волютина | Полифосфатные внутриклеточные депо | Обусловливает связывание основных красителей и выраженную метахромазию |
| Локализация зерен | Чаще полярная, иногда биполярная | Формирует характерную полярную зернистость коринебактерий |
| Corynebacterium diphtheriae | Палочковидные, булавовидные клетки с выраженными полярными зернами | Поддерживает предположительную идентификацию возбудителя дифтерии |
| Расположение клеток | Возможны скопления в виде V-, Y-образных фигур и китайских иероглифов | Дополнительный морфологический признак коринебактерий |
| Миколовые кислоты | Не являются объектом окраски по Нейссеру | Обеспечивают кислотоустойчивость микобактерий и выявляются методами Циля—Нильсена или Киньона |
| Галактоманнан | Не определяет результат окраски по Нейссеру | Может использоваться как маркер грибковой инфекции, например при диагностике аспергиллеза |
| Смещение длины волны | Физико-химическое проявление метахромазии | Объясняет различие оттенков, но не заменяет выявление самих зерен волютина |
Интенсивность и количество зерен могут зависеть от возраста культуры, состава питательной среды и условий выращивания. Поэтому отрицательный или слабый результат окраски не исключает наличие коринебактерий. Окончательное заключение основывают на совокупности морфологических, культуральных, биохимических и токсикологических данных.