2) окраской по Леффлеру (+)
3) темнопольной микроскопией
4) окраской по Граму
Зерна волютина у Corynebacterium diphtheriae представляют собой внутриклеточные скопления полифосфатов, которые преимущественно располагаются в полюсах бактериальной клетки. Для них характерна метахромазия — способность окрашиваться в оттенок, отличающийся от основного цвета красителя. При окраске метиленовым синим по Леффлеру эти включения становятся хорошо заметными на фоне цитоплазмы, поэтому данный метод применяют для ориентировочной морфологической идентификации дифтерийных коринебактерий.
Микроскопически C. diphtheriae имеет вид грамположительных или иногда грамвариабельных булавовидных палочек, располагающихся под углом друг к другу в виде букв V, L или так называемых китайских иероглифов . Окраска по Граму позволяет оценить форму бактерий и их отношение к красителю, но не предназначена для специфического выявления волютиновых включений; темнопольная микроскопия также не является методом их обнаружения. Метахроматические гранулы имеют диагностическое значение как ориентировочный признак, однако не являются строго специфичными для C. diphtheriae и сами по себе не подтверждают токсигенность штамма.
| Метод или признак | Диагностическое значение |
|---|---|
| Окраска метиленовым синим по Леффлеру | Позволяет выявить метахроматические, преимущественно полярно расположенные зерна волютина |
| Окраска по Нейссеру или Альберту | Специальные методы демонстрации метахроматических гранул коринебактерий |
| Окраска по Граму | Выявляет грамположительные или грамвариабельные булавовидные палочки, но не служит основным методом обнаружения волютина |
| Расположение клеток | Характерны угловые V- и L-образные структуры, палисады и фигуры типа китайских иероглифов |
| Зерна волютина | Содержат преимущественно полифосфаты и часто локализуются на полюсах клетки |
| Теллуритовые среды | Используются для селективного выделения подозрительных коринебактерий; колонии приобретают серо-чёрную или чёрную окраску |
| Выявление токсигенности | Требует специальных методов; наличие метахроматических гранул не доказывает способность штамма продуцировать дифтерийный токсин |
Таким образом, выбор окраски по Леффлеру основан на способности полифосфатных включений C. diphtheriae проявлять метахромазию при взаимодействии с метиленовым синим. Этот признак полезен на этапе ориентировочной лабораторной идентификации культуры, особенно в сочетании с характерной морфологией и расположением клеток. Для окончательного подтверждения возбудителя необходима культуральная и видовая идентификация, а клинически значимую токсигенность определяют отдельно. Поэтому обнаружение зерен волютина следует рассматривать как морфологический диагностический ориентир, а не как самостоятельное доказательство дифтерии.