2) ЛХАТ, переводящей свободный холестерин в эфиры холестерина
3) липопротеидлипазы
4) фосфолипазы
Ферментный колориметрический метод определения холестерина основан на последовательном превращении стеролов с последующей регистрацией окрашенного продукта. Сначала эфиры холестерина гидролизуются холестеролэстеразой до свободного холестерина, затем холестериноксидаза окисляет его с образованием холест-4-ен-3-она и перекиси водорода. Следует учитывать, что формулировка варианта о образовании холестерина и H2O2 химически неточна: холестерин является субстратом реакции, а не её продуктом.
Образовавшаяся перекись водорода в присутствии пероксидазы взаимодействует с хромогенами, например 4-аминоантипирином и фенолом, с образованием окрашенного хинониминового соединения. Интенсивность окраски, измеряемая фотометрически, прямо пропорциональна концентрации холестерина в исследуемой пробе. Поэтому именно холестериноксидаза является ключевым ферментом аналитической реакции, тогда как ЛХАТ участвует преимущественно во внутрисосудистом обмене липидов, а липопротеидлипаза и фосфолипазы катализируют превращения триглицеридов и фосфолипидов соответственно.
| Компонент или фермент | Основной субстрат | Реакция или функция | Значение для определения холестерина |
|---|---|---|---|
| Холестеролэстераза | Эфиры холестерина | Гидролиз эфиров до свободного холестерина и жирных кислот | Обеспечивает включение в анализ как свободного, так и эстерифицированного холестерина |
| Холестериноксидаза | Свободный холестерин | Окисление холестерина до холест-4-ен-3-она с образованием H2O2 | Ключевой этап ферментативного определения концентрации холестерина |
| Пероксидаза | Перекись водорода и хромогены | Образование окрашенного хинониминового продукта | Формирует измеряемый фотометрический сигнал |
| ЛХАТ | Свободный холестерин и лецитин | Этерификация холестерина в плазме с образованием эфиров | Физиологический фермент липидного обмена, но не основа стандартного лабораторного теста |
| Липопротеидлипаза | Триглицериды хиломикронов и ЛПОНП | Гидролиз триглицеридов до жирных кислот и глицерина | Участвует в обмене триглицеридов, а не в прямом определении холестерина |
| Фосфолипаза | Фосфолипиды | Гидролитическое расщепление фосфолипидов | Не обеспечивает специфическую аналитическую реакцию для холестерина |
В клинической лабораторной практике результат обычно отражает концентрацию общего холестерина, включающего свободную и эстерифицированную фракции. Специфичность метода определяется последовательностью реакций с участием холестеролэстеразы и холестериноксидазы, а количественная оценка — интенсивностью окраски хромогена. На результат могут влиять гемолиз, липемия, желтуха и лекарственные вещества, поэтому исследование выполняют с использованием валидированных реагентных наборов и калибраторов.