2) редуктометрическим
3) глюкозооксидазным
4) гексокиназным (+)
Гексокиназный метод считается референтным и наиболее аналитически точным способом определения концентрации глюкозы. На первом этапе гексокиназа катализирует фосфорилирование глюкозы с образованием глюкозо-6-фосфата. Затем глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа превращает этот продукт с образованием восстановленного НАДФ; его количество регистрируют фотометрически, обычно при длине волны 340 нм. Интенсивность сигнала прямо пропорциональна содержанию глюкозы в образце.
Высокая специфичность метода обусловлена последовательным использованием ферментативных реакций и стехиометрической связью между количеством глюкозы и измеряемым продуктом. По сравнению с химическими методами гексокиназное исследование меньше зависит от присутствия других восстанавливающих веществ, лекарственных препаратов и компонентов сыворотки, поэтому применяется как референтный подход при стандартизации лабораторной диагностики сахарного диабета. Глюкозооксидазный метод также обладает ферментативной избирательностью, но может зависеть от содержания кислорода и подвергаться влиянию аскорбиновой кислоты, мочевой кислоты, билирубина и других интерферентов.
| Метод | Принцип реакции | Основные особенности | Аналитическая оценка |
|---|---|---|---|
| Гексокиназный | Фосфорилирование глюкозы до глюкозо-6-фосфата с последующим образованием НАДФН | Строго контролируемая двухэтапная ферментативная реакция, фотометрическое измерение | Наиболее высокая точность и специфичность; референтный метод |
| Глюкозооксидазный | Окисление глюкозы до глюконовой кислоты и перекиси водорода | Количество перекиси водорода определяют хромогенной реакцией или электродом | Достаточно специфичен, но возможна интерференция кислорода и восстановителей |
| Ортотолуидиновый | Цветная реакция глюкозы с ортотолуидином в кислой среде | Химический, а не ферментативный способ; используется токсичный реагент | Ниже специфичность, возможное влияние других углеводов и компонентов образца |
| Редуктометрический | Восстановление ионов металлов редуцирующими веществами | Регистрируется суммарная восстановительная способность образца | Низкая специфичность: измеряются не только глюкоза, но и другие восстановители |
| Влияние аскорбиновой кислоты | Восстановление окрашенных продуктов или перекиси водорода | Особенно значимо для некоторых вариантов глюкозооксидазного и химического анализа | Возможны систематические отклонения результата |
| Лабораторное применение | Определение глюкозы в плазме или сыворотке | Результат должен быть сопоставим со стандартизованными калибраторами | Гексокиназный метод предпочтителен для точной диагностики и контроля качества |
Полученное значение гликемии интерпретируют с учетом вида биоматериала, времени взятия крови и соблюдения условий подготовки пациента. Для диагностики нарушений углеводного обмена особенно важно использовать плазму венозной крови и стандартизованный лабораторный метод. Преаналитические ошибки, включая задержку отделения плазмы от клеток, могут привести к снижению концентрации глюкозы вследствие продолжающегося гликолиза. Поэтому выбор гексокиназного метода должен сочетаться с правильным взятием, хранением и транспортировкой образца.