2) полимеразную цепную реакцию (+)
3) иммуногистохимическое исследование
4) проточную цитометрию
При грибовидном микозе моноклональность инфильтрата определяют молекулярно-генетическим методом — полимеразной цепной реакцией с анализом перестроек генов рецептора Т-лимфоцитов (TCR). В опухолевом клоне все клетки происходят от одного предшественника и несут одинаковую перестройку TCR, поэтому при амплификации участков, содержащих гипервариабельную область CDR3, выявляется преимущественно один доминирующий продукт или пик. Наличие идентичного клонального перестроения в повторных биоптатах либо в коже и крови усиливает диагностическую значимость результата.
Иммунофенотипирование и иммуногистохимия оценивают преимущественно состав и особенности клеток инфильтрата: для грибовидного микоза типичны зрелый Т-клеточный фенотип, чаще CD3+CD4+, а также утрата или уменьшение экспрессии CD5 и CD7. Эти признаки поддерживают диагноз, но сами по себе не доказывают происхождение клеток из одного клона. Проточная цитометрия может выявлять аберрантную популяцию Т-лимфоцитов и количественно характеризовать ее, однако определение генетической моноклональности наиболее непосредственно выполняется методом ПЦР.
Интерпретация результата должна проводиться совместно с клинической картиной, морфологией кожи и иммуногистохимическими данными. Отрицательный результат не исключает заболевание при малом количестве опухолевых клеток или технических ограничениях, а единичное клональное перестроение возможно и при некоторых реактивных воспалительных процессах.
| Метод или признак | Что оценивается | Диагностическое значение при грибовидном микозе | Основные ограничения |
|---|---|---|---|
| ПЦР перестроек генов TCR | Клональность Т-клеточной популяции по идентичным перестройкам рецептора | Наиболее прямой способ выявления моно- или олигоклонального инфильтрата | Возможны ложноотрицательные результаты при низкой опухолевой нагрузке и ложноположительные — при ограниченной реактивной клональности |
| Гистологическое исследование | Эпидермотропизм, атипия лимфоцитов, полосовидный или очаговый инфильтрат | Формирует морфологическую основу диагноза и позволяет оценить стадию поражения | Ранние формы могут иметь неспецифическую картину; морфология не определяет клональность напрямую |
| Иммуногистохимия | Распределение и экспрессия маркеров CD3, CD4, CD8, CD5, CD7 и других | Выявляет аберрантный Т-клеточный фенотип и поддерживает диагноз кожной Т-клеточной лимфомы | Потеря антигенов не является абсолютным признаком опухолевого клона |
| Проточная цитометрия | Иммунофенотип и соотношение субпопуляций Т- и В-лимфоцитов в клеточной суспензии | Позволяет обнаружить патологическую популяцию, особенно при исследовании крови | Требует достаточного количества жизнеспособных клеток и не заменяет молекулярный анализ TCR |
| Эпидермотропизм | Скопление атипичных лимфоцитов в эпидермисе, иногда формирование микроабсцессов Поспилова–Лютца | Характерный морфологический признак грибовидного микоза | Может быть выражен непостоянно и встречаться при других воспалительных дерматозах |
| Сопоставление клонов в динамике | Идентичность перестройки TCR в разных биоптатах или биологических средах | Повышает вероятность персистирующего опухолевого клона и помогает отличить его от случайной реактивной клональности | Требует стандартизированного забора материала и качественного молекулярного анализа |
| Клиническое стадирование | Распространенность пятен, бляшек, опухолей, поражения лимфатических узлов и внутренних органов | Определяет прогноз и лечебную тактику независимо от одного лабораторного теста | Не может самостоятельно подтвердить моноклональность инфильтрата |
Таким образом, ПЦР выявляет не просто наличие Т-лимфоцитов, а общий для них вариант перестройки TCR. Для повышения достоверности желательно исследовать репрезентативный биоптат с достаточным содержанием патологических клеток и сопоставлять результаты с морфологией. При сомнительном или отрицательном анализе возможно повторное исследование другого участка поражения. Клональность является важным аргументом в пользу лимфопролиферативного процесса, но диагноз грибовидного микоза устанавливают комплексно.