2) по методу Вейгерта
3) толуидиновым синим
4) суданом III
Для выявления грибов в гистологическом материале применяют PAS-реакцию — окрашивание периодической кислотой и реактивом Шиффа. Периодическая кислота окисляет углеводные компоненты клеточной стенки грибов, содержащиеся в глюканах, маннанах и других полисахаридах, с образованием альдегидных групп. Они взаимодействуют с реактивом Шиффа, вследствие чего элементы грибов приобретают интенсивную малиново-пурпурную окраску.
При микроскопии оценивают наличие окрашенных нитевидных структур — септированных или несептированных гиф, псевдогиф, спор и фрагментов мицелия. PAS-реакция особенно полезна при малом количестве возбудителя и в тканях с выраженной воспалительной или некротической реакцией, однако не является абсолютно специфичной: аналогично могут окрашиваться гликоген, слизь и базальные мембраны. Поэтому результат интерпретируют с учётом морфологии грибковых элементов и, при необходимости, подтверждают серебрением по Грокотту или культуральным исследованием.
| Метод окрашивания | Основная мишень | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| PAS-реакция с реактивом Шиффа | Полисахариды клеточной стенки грибов, гликоген, мукополисахариды | Гифы, псевдогифы и споры окрашиваются в малиново-пурпурный цвет |
| Серебрение по Грокотту | Компоненты клеточной стенки микроорганизмов | Грибковые структуры становятся чёрными или тёмно-коричневыми; метод высокочувствителен |
| Окраска по Вейгерту | В зависимости от варианта методики — эластические волокна или ядра | Не является стандартным способом выявления мицелия грибов |
| Толуидиновый синий | Кислые тканевые компоненты, нуклеиновые кислоты, гранулы тучных клеток | Выявляет метахромазию и особенности клеточного состава, но не предназначен для специфического поиска грибов |
| Судан III | Нейтральные жиры и другие липиды | Используется для выявления жировых включений, преимущественно в замороженных срезах |
| Окраска гематоксилином и эозином | Ядра и белковые компоненты тканей | Позволяет оценить воспаление и повреждение ткани, но может быть недостаточно чувствительной для обнаружения единичных грибковых элементов |
Положительная PAS-реакция указывает на наличие углеводсодержащих структур, поэтому окончательное заключение основывается не только на цвете, но и на характерной форме грибковых элементов. Для дерматомикозов особенно важна визуализация ветвящихся гиф и спор в роговом слое эпидермиса, волосах или ногтевых пластинках. При отрицательном результате в подозрительном случае учитывают возможную малую концентрацию возбудителя, неравномерное распределение мицелия и качество забора материала.