2) FISH для выявления перестройки гена EWSR1
3) ПЦР с обратной транскрипцией для выявления экспрессии химерных генов PAX3-FOXO1 и PAX7-FOXO1
4) FISH для выявления перестройки гена FOXO1
Оптимальным методом является ОТ-ПЦР, направленная на выявление конкретных химерных транскриптов EWSR1::FLI1 и EWSR1::WT1. Саркома Юинга определяется слиянием EWSR1 или, значительно реже, FUS с геном семейства ETS; наиболее распространённым вариантом является EWSR1::FLI1. Для десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли характерно другое патогенетически значимое слияние — EWSR1::WT1, кодирующее аберрантный транскрипционный фактор. Поэтому идентификация партнёра EWSR1 позволяет не только подтвердить молекулярную природу опухоли, но и непосредственно разграничить эти две морфологически сходные нозологии.
Изолированное выявление перестройки EWSR1 методом break-apart FISH недостаточно специфично: разрыв этого гена встречается при обеих рассматриваемых опухолях, а также при ряде других сарком и новообразований мягких тканей. Такой анализ подтверждает наличие реаранжировки, но обычно не устанавливает ген-партнёр. Напротив, ОТ-ПЦР выявляет экспрессируемую матричную РНК конкретного химерного гена, обеспечивая более точную нозологическую верификацию при наличии качественного материала. Исследования PAX3::FOXO1, PAX7::FOXO1 или перестройки FOXO1 применяются прежде всего при подозрении на альвеолярную рабдомиосаркому и не решают данную дифференциально-диагностическую задачу.
| Критерий | Саркома Юинга | Десмопластическая мелкокруглоклеточная опухоль |
|---|---|---|
| Основной молекулярный маркер | EWSR1::FLI1, реже EWSR1::ERG и другие слияния с генами семейства ETS | EWSR1::WT1 |
| Типичная транслокация | t(11;22)(q24;q12) при варианте EWSR1::FLI1 | t(11;22)(p13;q12) |
| Предпочтительный дифференцирующий тест | ОТ-ПЦР либо таргетное RNA-секвенирование с идентификацией конкретного химерного транскрипта | |
| Ограничение FISH на EWSR1 | Подтверждает перестройку гена, но без исследования партнёра не позволяет надёжно разграничить опухоли | |
| Иммуногистохимический профиль | Диффузная мембранная экспрессия CD99, часто NKX2.2; кератины обычно отсутствуют или экспрессируются очагово | Сочетанная экспрессия десмина, цитокератинов и EMA; характерна ядерная реакция с антителами к C-концевому участку WT1 |
| Морфологические особенности | Монотонные мелкие округлые клетки, обычно без выраженной десмопластической стромы | Гнёзда мелких округлых клеток, разделённые плотной десмопластической стромой |
| Типичная локализация | Кости и мягкие ткани конечностей, таза и грудной стенки | Преимущественно брюшная и тазовая полости с поражением серозных поверхностей |
Молекулярный результат следует интерпретировать совместно с локализацией опухоли, гистологической картиной и иммуногистохимическим профилем. Ни диффузная экспрессия CD99, ни изолированная перестройка EWSR1 не обладают абсолютной нозологической специфичностью. При отрицательной ОТ-ПЦР и сохраняющемся подозрении целесообразно использовать таргетное RNA-секвенирование, поскольку оно выявляет редкие варианты точек разрыва и альтернативные гены-партнёры. Точная классификация принципиальна для выбора протокола системной терапии, оценки прогноза и включения ребёнка в соответствующую группу клинического наблюдения.