2) 40/80 (+)
3) 0,1/0,5
4) 20/50
Для градиентной обработки сперматозоидов перед экстракорпоральным оплодотворением стандартно применяют двухслойную систему с плотностями около 40% и 80%. После нанесения эякулята на верхний слой проводят центрифугирование: компоненты с низкой плотностью, включая семенную плазму, клеточный детрит, лейкоциты и значительную часть неподвижных сперматозоидов, задерживаются в верхних фракциях или на границе слоёв.
Более подвижные, зрелые и функционально полноценные сперматозоиды способны пройти через оба слоя и концентрируются в осадке под 80%-ным слоем. Такой принцип основан на различии плотности и центрифугируемости клеток, а не на простом отборе по размеру. Полученный осадок после процедуры отмывают от компонентов градиента и используют для оплодотворения; метод обогащает образец подвижными сперматозоидами с относительно лучшими морфофункциональными характеристиками, но не гарантирует отсутствие генетических нарушений.
| Фракция или этап | Основная характеристика | Практическое значение |
|---|---|---|
| 40%-ный слой | Слой с меньшей плотностью, располагаемый сверху | Задерживает часть клеточного детрита, семенной плазмы и менее качественных клеточных элементов |
| 80%-ный слой | Более плотный нижний слой коллоидного раствора | Создаёт селективный барьер для прохождения сперматозоидов при центрифугировании |
| Поверхность градиента | Зона нанесения разжиженного эякулята | Исходный материал распределяется над 40%-ным слоем до начала центрифугирования |
| Интерфейс 40/80% | Промежуточная зона, где могут задерживаться клетки с недостаточной подвижностью | Обычно не является целевой фракцией и удаляется вместе с примесями |
| Осадок под 80%-ным слоем | Фракция сперматозоидов, прошедших градиент | Содержит преимущественно подвижные и более зрелые сперматозоиды и используется для дальнейшей отмывки |
| Центрифугирование | Разделение клеток по плотности и способности проходить градиент | Обеспечивает концентрирование целевой сперматозоидной фракции в нижнем осадке |
| Отмывка после градиента | Удаление коллоидного материала и остаточных примесей | Подготавливает сперматозоиды к инсеминации, ЭКО или ИКСИ и снижает риск токсического влияния компонентов среды |
Таким образом, сочетание 40% и 80% представляет собой типичный дискретный градиент плотности для селекции сперматозоидов. Конкретные значения могут немного отличаться в зависимости от коммерческой системы и лабораторного протокола, например применяются градиенты 45/90%. Эффективность процедуры оценивают по концентрации, прогрессивной подвижности и морфологии сперматозоидов после обработки. При выраженной олигозооспермии, астенозооспермии или наличии большого количества лейкоцитов выбор метода и параметры центрифугирования корректируют индивидуально.