2) из эякулята
3) эпидидимальных
4) тестикулярных (+)
Минимальная фрагментация ДНК обычно выявляется в тестикулярных сперматозоидах, поскольку они извлекаются до прохождения через придаток яичка и семявыносящий проток. На этом этапе сперматозоиды ещё не подвергались длительному воздействию активных форм кислорода, лейкоцитов, воспалительных медиаторов и факторов эпидидимального микроокружения. Повреждение ДНК нередко накапливается именно во время посттестикулярного созревания и транспортировки, особенно при варикоцеле, инфекционно-воспалительных заболеваниях, лихорадке, курении и других состояниях, сопровождающихся окислительным стрессом.
Эякулированные сперматозоиды имеют наиболее длительный контакт с эпидидимальным секретом и семенной плазмой, а также могут подвергаться дополнительному окислительному повреждению после эякуляции. Поэтому у мужчин с высоким индексом фрагментации ДНК использование тестикулярных сперматозоидов для ИКСИ в отдельных клинических ситуациях может сопровождаться снижением доли повреждённого генетического материала и улучшением репродуктивных исходов. Тестикулярные клетки при этом часто менее подвижны и функционально незрелы, поэтому их применение требует специализированного отбора и, как правило, метода ИКСИ.
Показатель фрагментации ДНК оценивают методами SCSA, TUNEL, SCD-теста или Comet assay; конкретные пороговые значения зависят от методики и лабораторного протокола. Важно учитывать, что низкий уровень фрагментации в тестикулярном материале не означает полной генетической полноценности всех клеток: возможны анеуплоидии, нарушения упаковки хроматина и другие дефекты сперматогенеза. Тем не менее именно отсутствие посттестикулярного окислительного воздействия объясняет преимущество тестикулярного источника при выраженной фрагментации ДНК в эякуляте.
| Источник сперматозоидов | Этап получения | Ожидаемый уровень фрагментации ДНК | Основные повреждающие факторы | Клинические особенности |
|---|---|---|---|---|
| Тестикулярные | До прохождения придатка яичка | Наиболее низкий, особенно у пациентов с высоким DFI в эякуляте | В основном внутритестикулярные нарушения сперматогенеза; отсутствует длительный посттестикулярный окислительный стресс | Часто снижены подвижность и степень зрелости; применяются преимущественно в сочетании с ИКСИ |
| Эпидидимальные | После созревания в придатке яичка | Выше, чем в тестикулярном материале, при наличии факторов риска | Воздействие активных форм кислорода и воспалительных факторов во время эпидидимального транзита | Сперматозоиды приобретают подвижность и оплодотворяющую способность, но могут накапливать повреждения ДНК |
| Полученные из семявыносящего протока | Постэпидидимальный этап транспортировки | Обычно выше, чем в яичке | Продолжение контакта с окислительной и воспалительной средой; длительность хранения в репродуктивном тракте | По степени повреждения ДНК ближе к эякулированным, чем к тестикулярным клеткам |
| Эякулированные | После прохождения всей мужской репродуктивной системы | Может быть высоким при мужском факторе бесплодия | Окислительный стресс, лейкоцитоспермия, варикоцеле, инфекции, курение, гипертермия, длительное воздержание | Основной материал для стандартного анализа спермы и тестирования DFI |
| DFI по SCSA | Оценка доли сперматозоидов с повреждённой ДНК | Часто условно: менее 15% — низкий, 15–25% — промежуточный, более 25% — повышенный | Пороговые значения зависят от набора, протокола и лаборатории | Используется для оценки репродуктивного прогноза, но интерпретируется вместе со спермограммой и клиническими данными |
| Тестикулярные сперматозоиды при высоком DFI эякулята | Хирургическое получение материала, TESE или micro-TESE | Нередко ниже, чем в эякуляте того же пациента | Исключение или сокращение периода посттестикулярного накопления повреждений | Не является рутинной заменой эякулята; метод рассматривается в индивидуальных случаях неудач ВРТ и выраженной фрагментации ДНК |
Таким образом, тестикулярный источник характеризуется наименьшей вероятностью вторичного повреждения ДНК после завершения сперматогенеза. Наибольшую диагностическую ценность имеет сравнение DFI в эякуляте с клиническими данными и результатами предыдущих циклов ВРТ. Выбор тестикулярных сперматозоидов должен учитывать их возможную незрелость, сниженные показатели подвижности и инвазивность получения. Решение о хирургическом извлечении принимают индивидуально после исключения корригируемых причин окислительного стресса.