2) всплытия swim-up (+)
3) фильтрации в колонках из стекловолокна
4) отмывания от семенной плазмы
Метод swim-up основан на способности прогрессивно подвижных сперматозоидов самостоятельно мигрировать из нижележащего слоя обработанного эякулята или клеточного осадка в расположенную над ним культуральную среду. После инкубации верхнюю фракцию осторожно отбирают: она содержит преимущественно сперматозоиды с активным поступательным движением, тогда как неподвижные клетки, лейкоциты, клеточный детрит и значительная часть семенной плазмы остаются в нижнем слое.
Такое разделение является функциональной селекцией по подвижности, а не по плотности клеток. Полученная суспензия обычно характеризуется высокой долей прогрессивно подвижных сперматозоидов, относительно хорошей морфологией и меньшим содержанием факторов, способствующих образованию активных форм кислорода. Метод особенно эффективен при нормальной или умеренно сниженной концентрации и подвижности сперматозоидов, однако при выраженной олигоастенозооспермии может приводить к недостаточному выходу клеток.
| Метод обработки | Принцип разделения | Расположение и движение клеток | Основные особенности |
|---|---|---|---|
| Swim-up из нативного эякулята | Самостоятельная миграция подвижных сперматозоидов | Культуральная среда находится над эякулятом; клетки перемещаются вверх | Высокая доля прогрессивно подвижных клеток, но сравнительно небольшой выход |
| Swim-up из осадка | Миграция после предварительной отмывки и центрифугирования | Среду наслаивают на клеточный осадок | Уменьшается содержание семенной плазмы, но дополнительное центрифугирование может повышать окислительный стресс |
| Градиент плотности | Разделение клеток по плотности и устойчивости к центрифугированию | Сперматозоиды проходят через слои градиента и концентрируются в нижнем осадке | Эффективен при большом количестве детрита и выраженной патозооспермии |
| Простая отмывка | Удаление семенной плазмы путем разведения и центрифугирования | Все клеточные элементы осаждаются совместно | Не обеспечивает полноценной селекции по подвижности и морфологии |
| Фильтрация | Задержка части неподвижных и морфологически измененных клеток фильтрующим материалом | Клетки проходят через колонку | Используется ограниченно из-за вариабельности выхода и возможного повреждения клеток |
| Критерий выбора метода | Исходная концентрация, прогрессивная подвижность и количество детрита | Оцениваются показатели спермограммы после разжижения эякулята | Swim-up предпочтителен при достаточном числе активно подвижных сперматозоидов |
Подготовка сперматозоидов необходима для внутриматочной инсеминации и большинства программ вспомогательных репродуктивных технологий. После обработки оценивают концентрацию, прогрессивную подвижность и общее число подвижных сперматозоидов в полученной фракции. Выбор между swim-up и градиентом плотности определяется исходным качеством эякулята и требуемым количеством клеток. При тяжелом мужском факторе чаще применяют градиентное центрифугирование или комбинированные схемы подготовки.