2) молекулярно-генетической диагностики (+)
3) микробиологического синтеза
4) биохимического анализа
Полимеразная цепная реакция относится к методам молекулярно-генетической диагностики, поскольку позволяет выявлять и многократно копировать заданный участок нуклеиновой кислоты. Специфичность исследования обеспечивают праймеры — короткие олигонуклеотидные последовательности, комплементарные границам исследуемого фрагмента ДНК. При диагностике РНК-содержащих возбудителей или анализе экспрессии генов предварительно выполняют обратную транскрипцию РНК в комплементарную ДНК.
Классическая ПЦР включает повторяющиеся циклы денатурации двуцепочечной ДНК, отжига праймеров и элонгации новой цепи термостабильной ДНК-полимеразой. В результате количество целевого фрагмента увеличивается экспоненциально, что позволяет обнаруживать минимальные количества генетического материала. Метод применяют для выявления инфекционных агентов, наследственных вариантов, соматических мутаций, хромосомных перестроек и других молекулярных маркеров.
ПЦР не предназначена для непосредственного определения комплекса антиген–антитело , характерного для иммунологических методов, и не является способом микробиологического синтеза. От биохимических исследований она отличается объектом анализа: ПЦР оценивает наличие, структуру или количество нуклеиновых кислот, тогда как биохимические тесты преимущественно измеряют концентрацию метаболитов, активность ферментов и другие химические показатели биологических жидкостей.
| Метод | Основная мишень | Принцип | Типичный результат |
|---|---|---|---|
| Качественная ПЦР | ДНК исследуемого объекта | Амплификация специфического участка | Обнаружено или не обнаружено |
| ПЦР с обратной транскрипцией | РНК | Синтез кДНК с последующей амплификацией | Наличие РНК-мишени или транскрипта |
| ПЦР в реальном времени | ДНК или кДНК | Регистрация флуоресценции во время амплификации | Количественная или полуколичественная оценка |
| Цифровая ПЦР | Редкие варианты нуклеиновых кислот | Разделение образца на множество микрореакций | Абсолютное число копий мишени |
| Иммуноферментный анализ | Антиген или антитело | Специфическое иммунное связывание с ферментной индикацией | Оптический сигнал, отражающий иммунную реакцию |
| Биохимический анализ | Метаболиты, белки, ферменты | Фотометрические, ферментативные или электрохимические реакции | Концентрация вещества или активность фермента |
Диагностическая ценность ПЦР зависит от правильного выбора биоматериала, качества выделения нуклеиновых кислот и предотвращения контаминации. Положительный результат указывает на наличие исследуемой генетической мишени, но не всегда подтверждает жизнеспособность микроорганизма или активную стадию заболевания. Интерпретацию проводят с учетом клинических данных, аналитической чувствительности тест-системы и результатов контрольных реакций. В лабораторной генетике ПЦР служит базовой технологией для генотипирования, поиска патогенных вариантов и подтверждения молекулярного диагноза.