2) обездвиженными в растворе гиалуроновой кислоты
3) прошедшими исключительно морфологическую оценку, без учета подвижности
4) прошедшими морфологическую оценку с применением объектива x6000
ИМСИ (IMSI, intracytoplasmic morphologically selected sperm injection) — это вариант ИКСИ, при котором сперматозоиды перед введением в ооцит подвергают дополнительному высокоразрешающему морфологическому отбору. Оценку проводят на инвертированном микроскопе с объективом высокой мощности, обычно ×60–×100, с использованием дифференциально-интерференционного контраста (DIC). Такая оптика позволяет выявлять мелкие дефекты головки сперматозоида, включая вакуоли, нарушения контуров и аномалии акросомальной области, которые могут быть неразличимы при стандартной микроскопии.
Поэтому верным является первый вариант: ИКСИ выполняют сперматозоидами, прошедшими дополнительную морфологическую селекцию при высоком увеличении. Важно отличать увеличение объектива от общего увеличения микроскопической системы: значения порядка ×6000–×8000 относятся к суммарному увеличению, а не к объективу ×6000. Подвижность также учитывается при выборе жизнеспособного сперматозоида; после отбора его обездвиживают непосредственно перед инъекцией механическим воздействием на хвост.
Гиалуроновая кислота используется преимущественно в методике PICSI для отбора сперматозоидов, способных связываться с гиалуронаном, что рассматривается как признак функциональной зрелости. Это не является определяющим критерием ИМСИ. Основной принцип ИМСИ — сочетание стандартного отбора жизнеспособных и подвижных клеток с их детальной морфологической оценкой в условиях сверхвысокого разрешения.
| Метод или этап | Основной критерий отбора | Особенности применения |
|---|---|---|
| Стандартная ИКСИ | Жизнеспособность, наличие движения и приемлемая форма сперматозоида | Морфологическая оценка проводится при обычном увеличении; микродефекты головки могут оставаться незаметными |
| ИМСИ | Детальная морфология сперматозоида при высоком увеличении | Используются объектив ×60–×100, DIC и суммарное увеличение до нескольких тысяч раз |
| Морфологические признаки при ИМСИ | Контуры головки, состояние акросомы, наличие и размер вакуолей, дефекты шейки и хвоста | Отбирают клетки без выраженных структурных аномалий; оценка проводится до инъекции |
| Обездвиживание перед ИКСИ | Не является методом морфологической селекции | После выбора сперматозоида хвост механически повреждают или прижимают для облегчения захвата и введения в ооцит |
| PICSI | Способность сперматозоида связываться с гиалуроновой кислотой | Оценивает преимущественно функциональную зрелость, но не заменяет высокоразрешающую морфологическую оценку ИМСИ |
| Достоверность увеличения | Различают увеличение объектива и общее увеличение системы | Объектив ×60–×100 в сочетании с окулярной и оптической системой обеспечивает суммарное увеличение порядка ×6000 и более |
ИМСИ направлена на снижение вероятности выбора сперматозоида с выраженными структурными дефектами, потенциально связанными с нарушением оплодотворения и раннего эмбрионального развития. Метод особенно рассматривают при тяжелом мужском факторе бесплодия, повторных неудачах ИКСИ или неоднократных нарушениях эмбрионального развития, однако его клиническая эффективность не является универсально доказанной для всех групп пациентов. ИМСИ не исключает необходимости оценки подвижности и жизнеспособности сперматозоидов. Отбор по гиалуроновой кислоте и высокоразрешающая морфологическая селекция представляют разные лабораторные подходы и не должны смешиваться.