2) вне зависимости от времени проведения денудации
3) перед денудацией ооцита
4) после проведения денудации ооцита (+)
Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида проводится после удаления клеток кумулюса и лучистого венца, окружающих ооцит. Денудация обеспечивает прямую визуализацию цитоплазмы, перивителлинового пространства и первого полярного тельца, что необходимо для оценки степени ядерной зрелости ооцита. Для ИКСИ отбирают преимущественно зрелые ооциты на стадии метафазы II, поскольку именно они имеют завершённое первое мейотическое деление и способны к нормальному оплодотворению.
Сохранённый кумулюс препятствует точной фиксации ооцита удерживающей микропипеткой, определению положения полярного тельца и безопасному введению инъекционной иглы. После денудации эмбриолог ориентирует полярное тельце вне предполагаемой траектории прокола, снижая вероятность повреждения мейотического веретена. Таким образом, удаление окружающих клеток является обязательным подготовительным этапом, обеспечивающим правильный отбор ооцитов и техническую безопасность микроинъекции.
| Этап или состояние | Основные признаки | Значение для ИКСИ |
|---|---|---|
| Ооцит до денудации | Окружён клетками кумулюса и лучистого венца | Точная оценка зрелости и ориентация ооцита затруднены |
| Денудация | Ферментативное и механическое удаление кумулюсных клеток | Обеспечивает визуализацию полярного тельца и морфологии ооцита |
| Стадия germinal vesicle, GV | В цитоплазме определяется зародышевый пузырёк | Ооцит незрелый; стандартное проведение ИКСИ не показано |
| Стадия метафазы I, MI | Зародышевый пузырёк отсутствует, первое полярное тельце не выявляется | Мейотическое созревание не завершено; оплодотворяющая способность снижена |
| Стадия метафазы II, MII | В перивителлиновом пространстве визуализируется первое полярное тельце | Оптимальная стадия зрелости для выполнения ИКСИ |
| Микроинъекция | Фиксация ооцита и введение одного иммобилизованного сперматозоида в цитоплазму | Выполняется после денудации и подтверждения зрелости ооцита |
| Контроль оплодотворения | Через установленный интервал оценивают наличие двух пронуклеусов и двух полярных телец | Подтверждает нормальное оплодотворение и завершение мейоза |
Денудацию обычно проводят после периода предварительной инкубации ооцит-кумулюсных комплексов, а микроинъекцию — после оценки зрелости выделенных ооцитов. Между удалением клеток и ИКСИ соблюдают лабораторно установленный интервал, исключая чрезмерно раннее вмешательство и длительное старение ооцита in vitro. Морфологическая оценка после денудации также позволяет выявить выраженные цитоплазматические или оболочечные аномалии, которые могут снижать вероятность нормального развития эмбриона. Последовательность денудация — оценка зрелости — ИКСИ является базовым принципом стандартизированного эмбриологического протокола.