2) в течение 3 минут
3) не позднее, чем через 10 минут
4) любого времени
Культурную среду следует покрывать эмбриотестированным минеральным маслом немедленно после нанесения в чашку и формирования капель. Открытая капля быстро контактирует с атмосферой, поэтому испарение воды приводит к увеличению осмолярности и изменению концентрации растворённых компонентов. Даже кратковременное осмотическое воздействие может нарушить состояние плазматической мембраны, цитоскелета и веретена деления ооцита, что потенциально снижает эффективность оплодотворения и последующего развития эмбриона.
При использовании бикарбонатно-буферных сред контакт с воздухом также вызывает изменение газового равновесия и сдвиг pH вследствие потери CO2. Минеральное масло уменьшает испарение, стабилизирует объём и осмолярность капель, ограничивает прямой контакт с атмосферой и снижает риск контаминации. Поэтому фиксированный интервал в 3 или 10 минут не может считаться безопасным: скорость изменений зависит от объёма капли, площади её поверхности, температуры, влажности и воздушных потоков в рабочей зоне.
| Параметр | При немедленном покрытии маслом | При задержке или отсутствии покрытия | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Испарение воды | Существенно ограничено | Продолжается с поверхности капли | Предотвращается концентрирование солей и субстратов |
| Осмолярность среды | Остаётся близкой к заданной | Повышается пропорционально потере воды | Снижается риск осмотического повреждения ооцита |
| Кислотно-основное состояние | Стабилизируется при использовании предварительно уравновешенной среды | Возможен сдвиг pH из-за изменения содержания CO2 | Поддерживаются физиологические условия для ооцита и эмбриона |
| Объём культуральной капли | Сохраняется, капля не уменьшается и не деформируется | Уменьшается, увеличивается концентрация клеточных продуктов | Сохраняется воспроизводимость условий культивирования |
| Температурно-газовая стабильность | Снижается интенсивность обмена с окружающей средой | Капля быстрее реагирует на колебания микроклимата | Уменьшается стресс при манипуляциях вне инкубатора |
| Риск контаминации | Формируется физический барьер от частиц и микроорганизмов | Среда остаётся открытой | Повышается биологическая безопасность процедуры |
| Критерий правильной подготовки | Вся рабочая капля полностью покрыта стерильным эмбриотестированным маслом | Имеются открытые участки или необработанные капли | Открытая среда не должна оставаться до начала манипуляций |
Минеральное масло не заменяет предварительное уравновешивание среды в условиях требуемых температуры и газового состава. Используют только стерильное масло, валидированное для репродуктивных технологий и не обладающее эмбриотоксичностью. Чашки готовят непосредственно перед работой, а после покрытия контролируют отсутствие пузырьков, разрывов масляного слоя и участков среды, контактирующих с воздухом. Таким образом, правильным принципом является немедленное покрытие среды, а не ожидание заранее установленного допустимого интервала.