2) возможна и не отличается от витрификации других бластоцист (+)
3) возможна, но при условии что Zona Pellucida из которой она вылупилась будет витрифицирована вместе с бластоцистой
4) невозможна, т.к. такие бластоцисты не переносят процедуру витрификации
Полностью вылупившаяся бластоциста может быть подвергнута витрификации, и отсутствие zona pellucida само по себе не является противопоказанием. Витрификация основана на кратковременном воздействии криопротекторов высокой концентрации и сверхбыстром охлаждении, при котором формирование внутриклеточных и внеклеточных кристаллов льда практически исключается. Поэтому защитная оболочка не является обязательным условием сохранения жизнеспособности эмбриона.
Полностью вылупившаяся бластоциста соответствует 6-й стадии расширения и вылупления по классификации Gardner: трофэктодерма и внутренняя клеточная масса находятся за пределами зоны пеллюцида. Перед замораживанием обычно добиваются коллапса бластоцеля, чтобы уменьшить объём жидкости и риск повреждения клеток; после оттаивания оценивают восстановление объёма, целостность внутренней клеточной массы и трофэктодермы, а также последующую реэкспансию. Технически такая бластоциста может быть несколько более уязвима к механическому повреждению и манипуляциям, однако при использовании валидированного протокола её витрификация не требует обязательного применения особого носителя или совместного замораживания оболочки.
Таким образом, определяющими факторами являются качество эмбриона, корректная экспозиция криопротекторам, минимизация времени до охлаждения и применение стандартизированной системы хранения. Показатели выживания после размораживания у полностью вылупившихся бластоцист в современных программах сопоставимы с показателями других бластоцист при одинаковом качестве и соблюдении технологии.
| Стадия бластоцисты | Морфологический признак | Значение для витрификации |
|---|---|---|
| Расширенная бластоциста | Полость увеличена, зона пеллюцида истончена, оболочка сохранена | Стандартный объект для витрификации; перед охлаждением предпочтителен коллапс бластоцеля |
| Начинающая вылупляться бластоциста | Часть трофэктодермы выходит через отверстие в zona pellucida | Витрификация допустима; требуется осторожное позиционирование эмбриона на носителе |
| Полностью вылупившаяся бластоциста | Эмбрион полностью находится вне zona pellucida; соответствует стадии 6 по Gardner | Витрификация возможна по обычному валидированному протоколу, без обязательного замораживания оболочки |
| Криопротекторная обработка | Последовательное воздействие растворов с проникающими и непроникающими криопротекторами | Обеспечивает обезвоживание клеток и снижение вероятности образования льда |
| Охлаждение | Сверхбыстрое снижение температуры до стеклообразного состояния | Сохраняет клеточные мембраны и внутриклеточные структуры при отсутствии кристаллизации |
| Оценка после оттаивания | Реэкспансия, сохранность внутренней клеточной массы и трофэктодермы | Основные критерии выживания и пригодности эмбриона к переносу |
Zona pellucida выполняет важную функцию на ранних этапах развития, но после вылупления её отсутствие не препятствует криоконсервации. Специальный носитель может использоваться в рамках конкретной лабораторной технологии, однако не является обязательным условием именно из-за полного вылупления. Решение о витрификации принимают с учётом морфологии, стадии развития и прогноза выживания после размораживания. Следовательно, правильным является утверждение о возможности витрификации без принципиального отличия от процедуры для других бластоцист.