2) TUNEL-теста
3) НВА-теста
4) теста на гипоосмотическое набухание сперматозоидов (+)
Тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов оценивает функциональную целостность плазматической мембраны — ключевой признак жизнеспособной клетки. При помещении сперматозоидов в гипоосмотическую среду вода поступает внутрь через сохранённую полупроницаемую мембрану. Это вызывает увеличение объёма клетки и характерное набухание либо закручивание хвоста, выявляемое при микроскопии. Сперматозоиды с повреждённой мембраной не способны поддерживать осмотический градиент и не демонстрируют такой реакции.
Метод особенно информативен при выраженной или полной астенозооспермии, когда отсутствие движения не позволяет отличить живые неподвижные сперматозоиды от погибших. Доля клеток с гипоосмотической реакцией отражает количество сперматозоидов с функционально сохранённой мембраной; такие клетки могут быть отобраны для интрацитоплазматической инъекции сперматозоида. В отличие от этого, HALO- и TUNEL-тесты исследуют повреждение ДНК, а HBA-тест характеризует зрелость сперматозоидов по способности связываться с гиалуроновой кислотой.
| Исследование | Оцениваемый параметр | Основной принцип | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Гипоосмотический тест | Жизнеспособность и функциональная целостность мембраны | Набухание и закручивание хвоста живых клеток в гипоосмотической среде | Дифференциация живых неподвижных и погибших сперматозоидов |
| Окрашивание эозином-нигрозином | Целостность плазматической мембраны | Краситель проникает в клетки с повреждённой мембраной | Стандартная морфологическая оценка витальности сперматозоидов |
| HALO-тест | Фрагментация хроматина | Оценка ореола дисперсии ДНК после денатурации и удаления белков | Выявление сперматозоидов с нарушенной целостностью генетического материала |
| TUNEL-тест | Одно- и двуцепочечные разрывы ДНК | Ферментативное мечение свободных концов фрагментированной ДНК | Количественная оценка индекса фрагментации ДНК |
| HBA-тест | Функциональная зрелость сперматозоидов | Связывание зрелых клеток с иммобилизованной гиалуроновой кислотой | Косвенная оценка зрелости и способности взаимодействовать с комплексом яйцеклетки |
| Оценка подвижности | Прогрессивное и непрогрессивное движение | Микроскопическая регистрация характера перемещения клеток | Не позволяет самостоятельно определить жизнеспособность неподвижных сперматозоидов |
Гипоосмотическая реакция служит функциональным, а не только морфологическим показателем состояния мембраны сперматозоида. Результат необходимо интерпретировать совместно с показателями концентрации, подвижности, морфологии и другими параметрами спермограммы. Особенно важно сопоставление витальности и подвижности: значительное преобладание неподвижных, но жизнеспособных клеток может указывать на структурные или функциональные нарушения жгутика. Таким образом, среди перечисленных методов именно гипоосмотический тест непосредственно позволяет установить жизнеспособность неподвижных сперматозоидов.