2) на синтетической среде
3) в культуре клеток Vero
4) на специальном агаре и бульоне (+)
Mycoplasma pneumoniae культивируют на специальных обогащённых агаровых и жидких средах, содержащих стеролы, холестерин, сыворотку и другие питательные компоненты. Бактерия относится к микоплазмам и не имеет клеточной стенки, поэтому обычные бактериологические среды для многих других возбудителей дыхательных инфекций недостаточно пригодны. Для выделения используют среды типа PPLO, Eaton или SP4; на плотной среде формируются очень мелкие колонии, нередко с характерным видом яичницы-глазуньи .
Рост M. pneumoniae медленный и может занимать от нескольких дней до 2–3 недель, поэтому культуральное исследование имеет ограниченное значение в рутинной клинической диагностике. В жидкой среде возбудитель размножается диффузно, а на агаре выявляется при микроскопическом исследовании колоний и последующей идентификации. Отсутствие клеточной стенки также определяет природную устойчивость микоплазмы к β-лактамным антибиотикам, включая пенициллины и цефалоспорины.
Культура клеток Vero не является стандартной системой для выделения M. pneumoniae: такие культуры преимущественно применяют для вирусологических исследований и некоторых внутриклеточных патогенов. Желточный мешок куриного эмбриона также не используется как основной метод культивирования этого возбудителя, а простая синтетическая среда не обеспечивает его потребность в липидах и стеролах. Поэтому правильным является выбор специальных агара и бульона.
| Метод или среда | Особенности | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Специальный агар | Обогащён стеролами и сывороточными компонентами; рост медленный, колонии мелкие, часто с феноменом яичницы-глазуньи | Позволяет выделить возбудитель и провести его последующую идентификацию |
| Специальный бульон | Жидкая питательная среда с липидами, холестерином и белковыми компонентами; размножение часто не сопровождается выраженным помутнением | Используется для накопления культуры и подтверждения роста микоплазмы |
| Обычные бактериологические среды | Не обеспечивают потребность микоплазмы в стеролах и других факторах роста | Непригодны для надёжного выделения M. pneumoniae |
| Культура клеток Vero | Клеточная линия, широко применяемая для вирусов; не является стандартной средой для рутинного выделения микоплазмы | Не рассматривается как правильный основной метод культивирования |
| Желточный мешок куриного эмбриона | Метод, исторически использовавшийся для отдельных внутриклеточных возбудителей | Не является типичной системой культивирования M. pneumoniae |
| ПЦР | Выявляет ДНК возбудителя непосредственно в мазке из дыхательных путей; результат получают значительно быстрее культуры | Предпочтительный современный метод подтверждения острой инфекции при наличии соответствующего материала |
| Серологическое исследование | Определяет антитела, включая нарастание титра в парных сыворотках; антитела появляются не сразу | Может дополнять ПЦР, особенно при позднем обращении, но не заменяет прямое выявление возбудителя |
Культуральное выделение M. pneumoniae требует специальных питательных условий из-за отсутствия клеточной стенки и высокой требовательности к липидам. В практической диагностике из-за медленного роста чаще используют ПЦР, а серологию рассматривают как дополнительный метод. При подтверждённой инфекции выбор антибиотика должен учитывать отсутствие мишени для β-лактамов; применяют препараты, активные в отношении микоплазм, например макролиды, тетрациклины или респираторные фторхинолоны с учётом возраста, противопоказаний и локальной устойчивости.