2) не допускается
3) допускается однократное (+)
4) допускается двукратное
При исследовании клинического материала на ротавирус допускается однократный цикл замораживания и последующего оттаивания. Ротавирус содержит двунитчатую РНК, заключённую в белковый капсид; повторные перепады температуры вызывают физико-химическое повреждение вирусных частиц, агрегацию белков и постепенное разрушение нуклеиновой кислоты. Это может снизить количество выявляемого антигена или вирусной РНК и привести к ложноотрицательному результату иммунологического либо молекулярно-биологического исследования.
Оптимально исследовать материал как можно скорее после взятия, доставляя его в условиях, рекомендованных лабораторным регламентом, обычно при охлаждении. Если немедленное исследование невозможно, образец замораживают однократно; после оттаивания его не следует повторно замораживать. Для предотвращения повторных циклов материал целесообразно заранее распределять на аликвоты — отдельные порции, рассчитанные на одно исследование.
Особенно важно соблюдать это правило при ПЦР, выявляющей РНК ротавируса, и при определении вирусного антигена в кале. Даже если однократное замораживание обычно не исключает возможность диагностики, многократное замораживание-оттаивание повышает риск деградации исследуемого компонента и несоответствия результата истинной вирусной нагрузке.
| Этап обращения с материалом | Рекомендуемый подход | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Сбор образца | Использовать чистую герметичную ёмкость; не допускать загрязнения посторонними примесями | Снижает риск ингибирования ПЦР и ошибочной интерпретации результата |
| Кратковременное хранение | Сохранять материал в охлаждённом состоянии в сроки, установленные методикой лаборатории | Замедляет разрушение вирусного антигена и РНК |
| Отсроченное исследование | Заморозить образец однократно, если исследование не может быть выполнено своевременно | Позволяет сохранить материал до проведения анализа без лишнего температурного стресса |
| Оттаивание | Размораживать только необходимую для анализа порцию, предпочтительно непосредственно перед исследованием | Ограничивает время нахождения компонентов образца в нестабильном состоянии |
| Повторное замораживание | Не допускать повторного цикла; использовать предварительное разделение на аликвоты | Предотвращает накопленное повреждение капсида, антигена и вирусной РНК |
| Методы выявления | Применять валидированные тесты: обнаружение антигена или РНК ротавируса | Качество преаналитического этапа непосредственно влияет на чувствительность диагностики |
Правильный преаналитический этап является частью лабораторной диагностики ротавирусной инфекции, а не только условием хранения образца. Однократное замораживание-оттаивание считается допустимым компромиссом при необходимости отсрочить исследование. Повторные циклы следует рассматривать как фактор, способный снизить аналитическую чувствительность теста. При сомнительном результате необходимо учитывать сроки заболевания, качество образца и соблюдение условий транспортировки.