2) иммуноблотинг
3) реакция связывания комплемента
4) реакция непрямой геммаглютинации
Приоритетным методом выявления специфических антител к парвовирусу B19 является иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA). Метод основан на связывании антител пациента с антигенами вируса, фиксированными на твердой фазе, с последующим выявлением иммунного комплекса ферментной меткой. ИФА позволяет раздельно определять антитела классов IgM и IgG, обладает высокой чувствительностью и специфичностью, а также может применяться для количественной или полуколичественной оценки результатов.
Обнаружение anti-B19 IgM характерно для недавней или текущей инфекции; эти антитела обычно появляются примерно через 7–12 дней после заражения и сохраняются несколько недель или месяцев. IgG формируются позднее и, как правило, сохраняются длительно, свидетельствуя о перенесенной инфекции и наличии иммунологической памяти. Наиболее информативными признаками первичной инфекции являются выявление IgM, сероконверсия IgG или значимое нарастание их титра в парных сыворотках.
Иммуноблоттинг может использоваться как подтверждающий метод, но не относится к стандартному первичному скринингу. Реакция связывания комплемента имеет более низкую чувствительность и в настоящее время применяется ограниченно, а реакция непрямой гемагглютинации уступает ИФА по стандартизации и возможностям раздельного определения классов иммуноглобулинов. При иммунодефицитах антительный ответ может быть недостаточным, поэтому серологическое исследование дополняют обнаружением ДНК парвовируса B19 методом ПЦР.
| Результат исследования | Наиболее вероятная интерпретация | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| IgM отрицательные, IgG отрицательные | Антитела не выявлены | Отсутствие серологических признаков инфекции; сохраняется восприимчивость, при раннем обследовании возможно повторное исследование |
| IgM положительные, IgG отрицательные | Ранняя первичная инфекция | Требуется клиническая оценка и, при необходимости, повторное исследование для подтверждения сероконверсии |
| IgM положительные, IgG положительные | Недавняя или продолжающаяся инфекция | Типичная серологическая картина острой инфекции; учитывают сроки появления симптомов и длительность сохранения IgM |
| IgM отрицательные, IgG положительные | Перенесенная инфекция или сформированный иммунный ответ | Признаков активной первичной инфекции по серологии обычно нет |
| ПЦР на ДНК B19 положительная | Наличие вирусного генетического материала в образце | Особенно важна при иммунодефиците, хронической анемии, беременности и отсутствии полноценного антительного ответа |
| Иммуноблоттинг | Подтверждение антительного ответа к отдельным вирусным белкам | Дополнительный, а не основной метод массового выявления специфических иммуноглобулинов |
| РСК и реакция непрямой гемагглютинации | Альтернативные серологические методы | Ограничены по чувствительности, специфичности и стандартизации по сравнению с ИФА |
Интерпретация результата ИФА должна учитывать срок от предполагаемого заражения и клиническую ситуацию. У беременных, пациентов с иммунодефицитом и лиц с транзиторным апластическим кризом отрицательная серология не всегда исключает инфекцию. В таких случаях целесообразно исследование парных сывороток и/или ПЦР. Таким образом, ИФА является основным методом серологической диагностики благодаря возможности надежного и дифференцированного определения anti-B19 IgM и IgG.