2) производных ароматических аминокислот
3) производных спиртов
4) производных алифатических аминокислот
Принцип лигниновой пробы
Лигниновая проба предназначена для экспресс-обнаружения свободной первичной ароматической аминогруппы Ar–NH2, непосредственно связанной с ароматическим ядром. Исследуемое вещество наносят на лигнинсодержащую бумагу или древесный материал, обычно после подкисления. При наличии такой функциональной группы образуются окрашенные продукты взаимодействия с компонентами лигнина; появление желтоватого, оранжево-бурого или иного характерного окрашивания расценивают как положительную реакцию.
В основе реакции лежит взаимодействие первичного ароматического амина с фенольными и другими реакционноспособными структурными фрагментами лигнина с формированием сопряжённых окрашенных продуктов конденсации и окислительного сопряжения. Для положительной реакции аминогруппа должна оставаться свободной: если она превращена в амид, соль, производное мочевины или иным образом химически замаскирована, интенсивность окраски снижается либо реакция не наблюдается. Поэтому проба используется как групповой ориентировочный тест, а не как окончательное подтверждение структуры препарата.
| Признак | Первичные ароматические амины | Производные ароматических аминокислот | Производные спиртов | Производные алифатических аминокислот |
|---|---|---|---|---|
| Определяющая функциональная группа | Свободная Ar–NH2, соединённая непосредственно с ароматическим кольцом | Может присутствовать карбоксильная группа и аминогруппа, но не обязательно свободная ароматическая Ar–NH2 | Гидроксильная группа или её производное; аминогруппа отсутствует | Аминогруппа связана с алифатическим атомом углерода, например H2N–CH(R)–COOH |
| Результат лигниновой пробы | Положительная: появляется характерное окрашивание лигнина | Возможна только при наличии свободной первичной ароматической аминогруппы; принадлежность к аминокислотам сама по себе реакции не определяет | Отрицательная | Обычно отрицательная |
| Химическая причина | Образование окрашенных сопряжённых продуктов взаимодействия аминогруппы с реакционноспособными фрагментами лигнина | Реакция зависит от строения конкретного производного и сохранности свободной Ar–NH2 | Нет необходимого аминного фрагмента для образования окрашенного продукта | Алифатическая аминогруппа не обладает требуемым ароматическим сопряжением |
| Типичные представители | Анилин, бензокаин, некоторые сульфаниламиды с незамещённой ароматической аминогруппой | Производные аминобензойной кислоты — только при сохранении свободной ароматической аминогруппы | Эфиры, спирты и их производные | Аминокислоты алифатического ряда и их эфиры |
| Диагностическая ценность | Групповая экспресс-идентификация первичной ароматической аминогруппы | Не позволяет заключить о классе вещества без дополнительных реакций | Для данной группы диагностически неинформативна | Для данной группы диагностически неинформативна |
| Подтверждающее исследование | Диазотирование с последующим азосочетанием, инструментальные методы или фармакопейная идентификация | Дополнительные реакции на аминогруппу, карбоксильную группу и конкретный заместитель | Реакции на спиртовую или эфирную функциональную группу | Реакции на алифатическую аминогруппу и карбоксильный фрагмент |
Положительная лигниновая проба указывает прежде всего на наличие свободной первичной ароматической аминогруппы, а не на принадлежность вещества к определённому лекарственному классу. Отрицательный результат не исключает аминопроизводное, если аминогруппа замещена или химически защищена. В фармацевтическом анализе реакцию применяют для быстрого предварительного контроля, после чего результат подтверждают более специфичными химическими или инструментальными методами.