2) разделении смесей, в котором разделяемые компоненты распределены между двумя фазами (+)
3) свойстве вещества вращать плоскость поляризации при прохождении через него поляризованного света
4) избирательном поглощении электромагнитного излучения
Хроматография основана на разделении компонентов смеси вследствие их неодинакового распределения между неподвижной и подвижной фазами. Неподвижная фаза может быть твердым сорбентом или жидкостью, иммобилизованной на носителе, а подвижная фаза представлена жидкостью либо газом. Компоненты, обладающие различным сродством к фазам, перемещаются с неодинаковой скоростью и выходят из системы в разное время.
Ключевой аналитический параметр хроматографии — время удерживания, то есть интервал от введения пробы до регистрации максимума сигнала соответствующего компонента. Разделение может происходить за счет адсорбции, распределения, ионного обмена, молекулярно-ситового эффекта или специфического биологического взаимодействия. После разделения вещества идентифицируют по времени удерживания, а их содержание определяют по площади или высоте хроматографического пика.
Измерение электрического тока между электродами относится к электрохимическим методам анализа, вращение плоскости поляризации — к поляриметрии, а избирательное поглощение электромагнитного излучения — к спектрофотометрии. Эти методы могут применяться совместно с хроматографией для детектирования компонентов, но не определяют сам принцип хроматографического разделения.
| Метод или разновидность | Физико-химическая основа | Основной аналитический признак |
|---|---|---|
| Хроматография | Неодинаковое распределение компонентов между неподвижной и подвижной фазами | Время удерживания, положение зоны или хроматографического пика |
| Адсорбционная хроматография | Различная адсорбция веществ на поверхности твердого сорбента | Различная скорость перемещения зон по слою сорбента |
| Ионообменная хроматография | Обратимый обмен ионов анализируемых веществ с ионогенными группами неподвижной фазы | Удерживание зависит от заряда, ионной силы и pH элюента |
| Высокоэффективная жидкостная хроматография | Разделение в колонке под высоким давлением при прохождении жидкой подвижной фазы | Хроматограмма с пиками, по которым проводят идентификацию и количественный анализ |
| Электрохимические методы | Регистрация электрических параметров системы с электродами | Сила тока, потенциал, электропроводность или сопротивление раствора |
| Поляриметрия | Измерение вращения плоскости поляризации оптически активным веществом | Угол вращения, связанный с концентрацией и удельным вращением вещества |
| Спектрофотометрия | Избирательное поглощение электромагнитного излучения молекулами | Оптическая плотность при определенной длине волны |
Хроматографическое разделение особенно важно для анализа многокомпонентных лекарственных препаратов, примесей и продуктов деградации. Эффективность метода оценивают по разрешению пиков, селективности, числу теоретических тарелок и симметрии пиков. Выбор неподвижной и подвижной фаз позволяет адаптировать метод к полярности, молекулярной массе, заряду и химической стабильности анализируемых веществ. Поэтому распределение компонентов между двумя фазами является фундаментальным принципом хроматографии.