2) бромфеноловый синий
3) фенолфталеин (+)
4) бромтимоловый синий
При формольном титровании по Сёренсену формальдегид взаимодействует с α-аминогруппой глутаминовой кислоты, образуя производное, в котором основные свойства аминогруппы существенно уменьшаются. Это сопровождается высвобождением протонов и переводом аминокислоты в форму, пригодную для последующего титрования раствором щёлочи. Количество израсходованного титранта связано с содержанием глутаминовой кислоты.
Конечная точка такого титрования находится в слабощелочной области, поэтому используют фенолфталеин, интервал перехода которого составляет примерно pH 8,2–10,0. В этой зоне индикатор изменяет окраску с бесцветной на устойчивую розовую, что позволяет визуально зафиксировать нейтрализацию кислотных эквивалентов после реакции с формальдегидом. Индикаторы с переходом в кислой или близкой к нейтральной области не соответствуют рН эквивалентной точки и могут приводить к систематической ошибке результата.
| Индикатор | Интервал перехода, pH | Окраска в щелочной форме | Пригодность для формольного титрования |
|---|---|---|---|
| Метиловый оранжевый | 3,1–4,4 | Жёлтая | Непригоден: переход происходит в кислой среде, значительно раньше точки эквивалентности |
| Бромфеноловый синий | 3,0–4,6 | Сине-фиолетовая | Непригоден: не фиксирует слабощелочной конечный этап титрования |
| Бромтимоловый синий | 6,0–7,6 | Синяя | Недостаточно точен: переход расположен около нейтральной, а не слабощелочной области |
| Фенолфталеин | 8,2–10,0 | Розовая | Оптимален: соответствует рН конечной точки формольного титрования |
| Формальдегид | — | — | Маскирует аминогруппу аминокислоты и делает возможным количественное титрование высвободившихся кислотных эквивалентов |
| Раствор щёлочи | — | — | Нейтрализует протоны, образующиеся при взаимодействии аминогруппы с формальдегидом; расход щёлочи используют для расчёта содержания вещества |
Таким образом, выбор фенолфталеина определяется не строением индикатора как таковым, а соответствием его интервала перехода рН конечной точке реакции. Для глутаминовой кислоты это особенно важно, поскольку молекула содержит одну аминогруппу и две карбоксильные группы, участвующие в кислотно-основном равновесии. Устойчивое слабое розовое окрашивание служит аналитическим признаком достижения требуемой точки титрования.