2) тиохромная
3) мурексидная
4) цианиновая (+)
Рутозид (рутин) и кверцетин относятся к флавоноидам: рутозид является 3-O-рутозидом кверцетина, то есть гликозидом, а кверцетин — его агликоном. Для их обнаружения применяют цианиновую пробу, также известную как реакция Шиноды: исследуемое вещество обрабатывают металлическим магнием в присутствии хлористоводородной кислоты. Появление розового, красного или оранжево-красного окрашивания расценивают как положительную реакцию на флавоноидные соединения.
Химическая основа реакции заключается в восстановлении флавоноидной системы в кислой среде с образованием окрашенных флавилиевых и близких к антоцианидиновым структур. Наличие сопряжённой ароматической системы, карбонильной группы и гидроксильных заместителей в молекуле кверцетина обеспечивает развитие характерного окрашивания; у рутозида реакция также протекает благодаря сохранению флавонольного ядра в составе гликозида. Проба является качественной групповой реакцией и подтверждает присутствие флавоноидов, но не позволяет самостоятельно надёжно различить рутозид и кверцетин.
Остальные перечисленные реакции имеют другую аналитическую направленность. Нингидриновая проба характерна прежде всего для аминокислот и других соединений с аминогруппой, тиохромная — для тиамина, а мурексидная — для пуриновых оснований и их производных. Поэтому именно цианиновая проба соответствует химической природе рутозида и кверцетина.
| Проба | Основная область применения | Химическая основа | Типичный результат | Интерпретация |
|---|---|---|---|---|
| Цианиновая | Флавоноиды | Восстановление флавоноидного ядра магнием в кислой среде | Розовое, красное или оранжево-красное окрашивание | Положительный признак наличия флавоноидных соединений |
| Нингидриновая | Аминокислоты, пептиды, первичные амины | Образование окрашенного продукта с α-аминогруппой | Сине-фиолетовое окрашивание | Не является специфичной реакцией на флавоноиды |
| Тиохромная | Тиамин (витамин B1) | Окисление тиамина с образованием флуоресцирующего тиохрома | Голубая флуоресценция в ультрафиолетовом свете | Диагностический признак тиамина |
| Мурексидная | Пурины, мочевая кислота, алкалоиды пуринового ряда | Окисление и образование окрашенных аммонийных пурпуратов | Красно-фиолетовое или пурпурное окрашивание | Характерна для пуриновых производных, а не для рутина |
| Рутозид | Флавонольный гликозид | Флавоноидное ядро кверцетина, связанное с дисахаридом рутинозой | Положительная цианиновая проба | Групповое подтверждение флавоноидной природы |
| Кверцетин | Флавонольный агликон | Полиоксигенированная флавонольная структура | Положительная цианиновая проба | Результат требует подтверждения инструментальными методами |
Для окончательной идентификации вещества цианиновую пробу сочетают с тонкослойной хроматографией, спектрофотометрией или высокоэффективной жидкостной хроматографией. При исследовании рутозида дополнительно учитывают реакцию гидролиза с образованием кверцетина и сахаров. В фармакопейном анализе положительная цветная реакция рассматривается как предварительный групповой признак, а не как единственный критерий подлинности конкретного флавоноида.