2) фенилгидразином
3) гидроксиламином
4) 2,4-динитрофенилгидразином
Изониазид применяют для фотометрического количественного определения многих стероидных гормонов, содержащих в молекуле реакционноспособную карбонильную группу, прежде всего 3-кето-4-еновую систему кольца А. Гидразидная группа изониазида взаимодействует с карбонильным фрагментом стероида с образованием окрашенного производного — гидразона. Возникающий хромофор обладает характерным поглощением в видимой или ближней ультрафиолетовой области, поэтому интенсивность окраски можно измерять спектрофотометрически.
Для масляных растворов предварительно устраняют влияние липофильного растворителя и переводят определяемый стероид в среду, подходящую для проведения цветной реакции. При соблюдении регламентированных условий концентрация образующегося окрашенного продукта пропорциональна содержанию гормона в анализируемом препарате, что позволяет рассчитывать его количество по оптической плотности относительно стандартного образца. Реакция с изониазидом отличается достаточной чувствительностью и воспроизводимостью для ряда кортикостероидов и половых стероидных гормонов с соответствующими карбонильными функциональными группами.
| Реагент или подход | Химическая основа | Значение для анализа стероидов |
|---|---|---|
| Изониазид | Образование гидразона с карбонильной группой стероида | Широко применим для фотометрического определения ряда 3-кетостероидов |
| 3-кето-4-еновая система | Сопряжение карбонильной группы с двойной связью | Обеспечивает образование выраженного хромофора после реакции |
| Фенилгидразин | Также способен образовывать гидразоны с карбонильными соединениями | Не является основным унифицированным реагентом для рассматриваемого фармакопейного фотометрического определения |
| Гидроксиламин | Образует оксимы с альдегидами и кетонами | Используется в других аналитических реакциях, но не как типичный реагент данного метода |
| 2,4-Динитрофенилгидразин | Образует окрашенные 2,4-динитрофенилгидразоны карбонильных соединений | Широко применим для выявления карбонильных групп, однако менее специфичен для рассматриваемой методики стероидных препаратов |
| Фотометрическая регистрация | Измерение оптической плотности окрашенного производного | Позволяет количественно связать интенсивность поглощения с концентрацией гормона |
| Масляная лекарственная форма | Стероид растворён в липофильном носителе | Перед цветной реакцией требуется предусмотренная методикой пробоподготовка, исключающая влияние масла |
Таким образом, аналитическое значение изониазида обусловлено не фармакологическими свойствами вещества, а его гидразидной функциональной группой, способной вступать в реакцию с кетогруппой стероидов. Получение стабильного окрашенного производного создаёт основу для количественной спектрофотометрии. Специфичность метода определяется структурой конкретного гормона и строгим соблюдением условий реакции, экстракции и измерения оптической плотности.