2) алкалиметрию
3) метод перегонки с водяным паром
4) перманганатометрию
Спектрофотометрия применяется для количественного определения суммы флавоноидов благодаря наличию в их молекулах развитой системы сопряжённых двойных связей и ароматических колец, поглощающих ультрафиолетовое и видимое излучение. Интенсивность поглощения при выбранной длине волны подчиняется закону Бугера—Ламберта—Бера и в установленном диапазоне прямо пропорциональна концентрации анализируемых соединений.
В фармакопейном анализе часто используют дифференциальную спектрофотометрию после образования окрашенного комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом. Комплексообразование с гидроксильными и карбонильными группами вызывает батохромный сдвиг полосы поглощения и повышает селективность определения. Результат обычно рассчитывают в пересчёте на стандартный флавоноид, например рутин, кверцетин или лютеолин, в соответствии с требованиями конкретной фармакопейной статьи.
| Метод | Аналитический принцип | Основные объекты определения | Применимость к флавоноидам |
|---|---|---|---|
| Спектрофотометрия | Измерение оптической плотности раствора при заданной длине волны | Соединения с хромофорными системами | Основной метод количественного определения суммы флавоноидов |
| Дифференциальная спектрофотометрия | Сравнение поглощения исследуемого раствора и раствора сравнения после комплексообразования | Флавоноиды, образующие комплексы с алюминия хлоридом | Повышает селективность и уменьшает влияние сопутствующих веществ |
| Алкалиметрия | Титрование кислотных веществ стандартным раствором щёлочи | Органические кислоты и другие соединения с выраженными кислотными свойствами | Не является стандартным методом определения суммы флавоноидов |
| Перегонка с водяным паром | Выделение летучих веществ совместно с водяным паром | Эфирные масла и другие летучие компоненты | Непригодна, поскольку большинство флавоноидов нелетучи |
| Перманганатометрия | Окислительно-восстановительное титрование раствором калия перманганата | Восстановители и легкоокисляемые вещества | Недостаточно селективна для сложной смеси флавоноидов |
| Высокоэффективная жидкостная хроматография | Разделение компонентов смеси с последующим детектированием | Индивидуальные флавоноиды и их гликозиды | Используется для уточняющего компонентного анализа и стандартизации |
Достоверность спектрофотометрического определения зависит от полноты экстракции, состава растворителя, времени комплексообразования и соблюдения установленной длины волны. Для расчёта содержания строят градуировочную зависимость или используют удельный показатель поглощения стандартного образца. Метод позволяет стандартизировать лекарственное растительное сырьё по содержанию биологически активных веществ и контролировать стабильность его качества. При необходимости определения отдельных флавоноидов спектрофотометрию дополняют хроматографическими методами.