2) с реактивом Драгендорфа
3) с железа (III) аммония сульфатом
4) цианидиновой пробы (+)
Правильным является применение цианидиновой пробы, также известной как реакция Шиноды. При добавлении к спиртовому извлечению металлического магния или цинка и концентрированной хлористоводородной кислоты флавоноидные соединения восстанавливаются с образованием окрашенных производных антоцианидинового типа. Появление розовой, красной, малиновой или оранжево-красной окраски расценивают как положительный результат.
В основе реакции лежит восстановительное превращение сопряжённой γ-пироновой системы флавонов и флавонолов. Металл служит донором электронов, а кислая среда обеспечивает протонирование кислородсодержащих групп; образующиеся соединения имеют протяжённую систему сопряжённых двойных связей и поглощают свет в видимой области спектра. Выраженность и оттенок окраски зависят от строения флавоноида, количества гидроксильных групп и наличия заместителей.
Другие перечисленные реакции обладают иной аналитической направленностью. Реактив Драгендорфа выявляет преимущественно алкалоиды посредством образования окрашенных малорастворимых ионных ассоциатов, а соли железа(III) взаимодействуют со многими фенольными соединениями и поэтому не являются специфическим доказательством присутствия флавоноидов. Йодная реакция наиболее характерна для крахмала и некоторых других полисахаридов.
| Реакция или реактив | Основная выявляемая группа | Принцип взаимодействия | Положительный признак |
|---|---|---|---|
| Цианидиновая проба | Флавоны, флавонолы и часть других флавоноидов | Восстановление сопряжённой кислородсодержащей системы металлом в кислой среде | Розовая, красная, малиновая или оранжевая окраска |
| Реакция с алюминия хлоридом | Многие флавоноиды | Образование комплекса с карбонильными и фенольными гидроксильными группами | Жёлтая окраска или флуоресценция, усиливающаяся в ультрафиолетовом свете |
| Реактив Драгендорфа | Алкалоиды | Образование ионного ассоциата протонированного алкалоида с тетрайодобисмутат-ионом | Оранжевый, красно-оранжевый или бурый осадок |
| Соли железа(III) | Дубильные вещества и другие фенольные соединения | Комплексообразование с фенольными гидроксильными группами | Синяя, зелёная, фиолетовая или тёмная окраска |
| Раствор йода | Крахмал | Включение полийодидных цепей в спираль амилозы | Синее или сине-фиолетовое окрашивание |
| Щелочная проба | Флавоноиды и некоторые другие фенольные вещества | Образование окрашенных фенолят-ионов | Интенсивная жёлтая окраска, исчезающая после подкисления |
Цианидиновая проба относится к групповым качественным реакциям и используется для предварительного подтверждения флавоноидной природы исследуемой субстанции. Она не позволяет установить индивидуальное соединение или точно определить его содержание. Для подтверждения подлинности результат сопоставляют с данными тонкослойной или высокоэффективной жидкостной хроматографии и спектрофотометрии. При стандартизации растительных фармацевтических субстанций необходимо применять совокупность идентификационных испытаний, предусмотренных соответствующей фармакопейной статьёй.