2) хлороформом
3) водным этанолом (+)
4) водой
Изофлавоноиды относятся к фенольным соединениям класса флавоноидов, у которых ароматическое кольцо B присоединено к углероду C-3 гетероциклического кольца. В растительном сырье они присутствуют как в форме агликонов, так и в виде более полярных O-гликозидов. Смесь этанола с водой обладает промежуточной полярностью: этанол растворяет менее полярную изофлавоноидную часть молекулы, а вода способствует извлечению гликозидов и разрушению водородных связей соединений с компонентами клеточной стенки.
Поэтому водный этанол обеспечивает более полное и сбалансированное извлечение суммы изофлавоноидов по сравнению с чистой водой или неполярными органическими растворителями. Концентрацию этанола подбирают с учетом состава сырья и преобладающих форм веществ; на практике применяют водно-спиртовые смеси различной концентрации. Такой экстрагент хорошо смачивает растительную ткань, проникает в клеточные структуры и одновременно растворяет фенольные агликоны и их гликозиды.
Хлороформ преимущественно извлекает липофильные компоненты — эфирные масла, смолы, воски и некоторые пигменты, поэтому для изофлавоноидов он недостаточно эффективен. Вода пригодна главным образом для высокополярных веществ, но хуже растворяет агликоны. Подкисленный этанол может использоваться для гидролиза гликозидных связей и получения агликонов, однако при этом изменяется исходный профиль соединений, что нежелательно при первичном извлечении всей суммы изофлавоноидов.
| Форма или группа соединений | Относительная полярность | Предпочтительный экстрагент | Особенности извлечения |
|---|---|---|---|
| Изофлавоновые агликоны | Умеренная | Этанол или водный этанол | Хорошо переходят в спиртовую фазу; содержание зависит от доли этанола |
| O-гликозиды изофлавоноидов | Более высокая | Водный этанол | Вода повышает растворимость сахарного фрагмента, этанол облегчает проникновение экстрагента в ткань |
| Изофлавоноидные конъюгаты и полярные производные | Высокая | Водно-спиртовые смеси с большей долей воды | Извлекаются эффективнее, чем чистым этанолом или хлороформом |
| Гидролиз гликозидов | Не относится к первичному извлечению | Подкисленный этанол | Переводит гликозиды в агликоны, поэтому меняет качественный и количественный состав извлечения |
| Липофильные сопутствующие вещества | Низкая | Хлороформ | Извлекаются преимущественно воски, смолы, липиды и часть пигментов, а не основная фракция изофлавоноидов |
| Высокополярные компоненты сырья | Высокая | Вода | Извлекаются сахара, соли, белковые и слизистые вещества; селективность по отношению к изофлавоноидам ниже |
Полученное водно-спиртовое извлечение при необходимости очищают от балластных веществ и анализируют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. При контроле качества важно раздельно учитывать агликоны и гликозидные формы, поскольку условия экстракции способны изменять их соотношение. Кислотный гидролиз используют как специальную аналитическую стадию, а не как универсальную замену водному этанолу. Следовательно, выбор водного этанола основан на оптимальном сочетании растворяющей способности, проникаемости в растительную ткань и сохранения исходного профиля изофлавоноидов.