2) Марки
3) Фелинга (+)
4) Манделина
Рутозид (рутин) представляет собой флавоноидный гликозид — кверцетин-3-О-рутinoside, углеводная часть которого состоит из дисахарида рутинозы: D-глюкозы и L-рамнозы. Для выявления глюкозы обычно проводят кислотный гидролиз гликозидной связи, после чего в гидролизате определяют образовавшиеся восстанавливающие сахара. В учебной качественной схеме для этого используют реактив Фелинга.
Реактив Фелинга содержит ионы меди(II) в щелочной тартратной среде. Восстанавливающая форма глюкозы переводит Cu2+ в Cu+, в результате чего образуется кирпично-красный осадок оксида меди(I) Cu2O. Следует учитывать, что интактный рутозид не проявляет выраженных восстановительных свойств, поскольку аномерный атом углерода глюкозы включён в гликозидную связь; поэтому реакцию проводят после гидролиза. Положительная реакция Фелинга подтверждает наличие восстанавливающего сахара, а специфическое отнесение его к глюкозе требует сопоставления с эталоном или применения хроматографического разделения.
Реактивы Фреде, Марки и Манделина являются общеалкалоидными цветными реагентами, основанными на окислительно-конденсационных реакциях в сильнокислой среде. Они применяются преимущественно для обнаружения алкалоидов и некоторых других азотсодержащих соединений, но не служат стандартными реагентами для подтверждения глюкозного фрагмента в гликозидах.
| Объект или реагент | Химическая основа | Диагностический результат | Интерпретация |
|---|---|---|---|
| Рутозид до гидролиза | Глюкоза связана с агликоном и не имеет свободной аномерной группы | Реакция Фелинга отсутствует или выражена слабо | Молекула ведёт себя как невосстанавливающий гликозид |
| Кислотный гидролиз рутозида | Расщепление О-гликозидной связи | Образуются кверцетин, глюкоза и рамноза | Углеводные компоненты становятся доступными для качественного анализа |
| Реактив Фелинга | Восстановление Cu2+ до Cu+ в щелочной среде | Кирпично-красный осадок Cu2O | Признак восстанавливающего сахара в гидролизате |
| Глюкоза | Равновесие циклической и открытой альдегидной форм | Положительная проба Фелинга | Подтверждается при исследовании выделенной или хроматографически идентифицированной фракции |
| Рамноза | Свободная альдегидная форма после гидролиза | Также может восстанавливать Cu2+ | Положительная проба не является абсолютно специфичной только для глюкозы |
| Реактив Фреде | Молибдат в сильнокислой среде | Цветные продукты с рядом алкалоидов | Не используется как специфический тест на глюкозу |
| Реактивы Марки и Манделина | Кислотно-окислительные и конденсационные превращения | Характерное окрашивание некоторых алкалоидов | Для подтверждения углеводной части рутозида диагностического значения не имеют |
Таким образом, выбор реактива Фелинга основан на способности глюкозы после гидролиза восстанавливать ионы меди(II). Для повышения достоверности анализа реакцию выполняют параллельно с отрицательным контролем и стандартным раствором глюкозы. При необходимости структурное подтверждение проводят тонкослойной или высокоэффективной жидкостной хроматографией. Результат следует трактовать с учётом того, что другие восстанавливающие сахара, включая рамнозу, также могут давать положительную пробу.