2) перманганатометрическое титрование
3) гравиметрия
4) спектрофотометрия (+)
Спектрофотометрия является основным фармакопейным методом количественного определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье благодаря наличию у этих соединений сопряжённой хромофорной системы, способной поглощать ультрафиолетовое и видимое излучение. После экстракции флавоноидов из сырья измеряют оптическую плотность раствора при установленной длине волны; содержание рассчитывают по калибровочному графику или относительно стандартного образца, например рутина, гиперозида или кверцетина.
Для повышения селективности часто применяют реакцию комплексообразования с хлоридом алюминия. Образующийся окрашенный комплекс имеет более выраженное и стабильное поглощение, что позволяет оценивать суммарное содержание флавоноидов в пересчёте на выбранный стандарт. Метод характеризуется достаточной чувствительностью, воспроизводимостью и возможностью стандартизации растительного сырья, поэтому используется в фармакопейных методиках контроля качества.
Перманганатометрическое титрование и гравиметрия не обладают необходимой специфичностью к флавоноидам: окислитель или осадитель взаимодействует с широким кругом сопутствующих веществ. Фотоэлектроколориметрия может применяться для измерения окрашенных растворов, но в современных методиках обычно уступает спектрофотометрии по селективности, точности и диапазону аналитических возможностей.
| Метод | Аналитический принцип | Основное применение | Ограничения |
|---|---|---|---|
| Спектрофотометрия | Измерение поглощения флавоноидов или их окрашенных комплексов в УФ- и видимой области | Фармакопейное определение суммы флавоноидов в пересчёте на стандартное вещество | Результат зависит от состава комплекса и спектральных свойств отдельных флавоноидов |
| Фотоэлектроколориметрия | Измерение интенсивности окраски раствора по светопоглощению | Вспомогательное или устаревающее определение окрашенных продуктов реакции | Меньшая спектральная селективность и более высокая зависимость от матричных примесей |
| Перманганатометрия | Окислительно-восстановительное титрование восстанавливающих веществ | Определение суммарной окисляемости отдельных объектов | Не позволяет специфично выделить вклад флавоноидов |
| Гравиметрия | Выделение и взвешивание осадка или сухого остатка | Определение веществ, образующих малорастворимые соединения | Низкая специфичность, трудоёмкость и недостаточная чувствительность для малых концентраций |
| Тонкослойная хроматография | Разделение компонентов по сорбции и визуализация зон | Идентификация флавоноидов и контроль подлинности сырья | Ограниченная точность количественного определения без специальной денситометрии |
| Высокоэффективная жидкостная хроматография | Разделение индивидуальных флавоноидов с последующим УФ- или масс-спектрометрическим детектированием | Профильный анализ и раздельное количественное определение отдельных соединений | Более сложное и дорогостоящее оборудование; не всегда является рутинным фармакопейным методом для суммы |
Спектрофотометрическое определение обычно оценивает не каждый флавоноид отдельно, а их суммарное содержание в стандартизованном пересчёте. Достоверность результата обеспечивается контролем специфичности реакции, линейности, правильности, прецизионности и стабильности аналитической системы. При необходимости идентификации и количественного определения отдельных компонентов применяют хроматографические методы. Выбор длины волны, экстрагента и условий комплексообразования устанавливается соответствующей фармакопейной методикой.