2) рефрактометрии
3) УФ-спектроскопии
4) тонкослойной хроматографии (+)
Правильный ответ — тонкослойная хроматография. В фармакопейном контроле стрептомицина сульфата этим методом определяют родственную примесь — стрептомицин B, образующуюся при биосинтезе антибиотика и отличающуюся от основного компонента строением углеводной части молекулы. Согласно фармакопейной статье, содержание этой примеси не должно превышать 3,0 %.
Метод основан на различии адсорбции и распределения стрептомицина B и производных основного вещества между слоем силикагеля и подвижной фазой. После хроматографического разделения пластинку обрабатывают реактивом на основе 1,3-дигидроксинафталина и серной кислоты с последующим нагреванием: углеводные фрагменты образуют окрашенные продукты, благодаря чему примесь выявляется в виде отдельного пятна. Интенсивность пятна в испытуемом растворе сравнивают с интенсивностью пятна стандартного раствора, соответствующего предельно допустимому содержанию примеси.
Рефрактометрия и УФ-спектроскопия не обеспечивают необходимой селективности, поскольку основное вещество и структурно близкая примесь обладают сходными физико-химическими и спектральными свойствами. Высокоэффективная жидкостная хроматография теоретически может применяться для анализа родственных соединений, однако в данной фармакопейной методике регламентирована именно тонкослойная хроматография как простое и воспроизводимое испытание предельного содержания стрептомицина B.
| Метод или критерий | Аналитический принцип | Значение для контроля примеси |
|---|---|---|
| Тонкослойная хроматография | Разделение компонентов по различию их адсорбции на силикагеле и растворимости в подвижной фазе | Фармакопейный метод определения стрептомицина B |
| Химическое проявление | Образование окрашенных продуктов углеводных фрагментов с 1,3-дигидроксинафталином в кислой среде | Позволяет визуализировать пятна основного вещества и примеси |
| Идентификация примеси | Совпадение положения пятна испытуемого образца с пятном раствора сравнения | Подтверждает присутствие стрептомицина B |
| Количественный критерий | Визуальное сравнение интенсивности пятен | Пятно примеси не должно быть интенсивнее стандартного пятна, соответствующего пределу 3,0 % |
| УФ-спектроскопия | Измерение суммарного поглощения раствора | Недостаточно селективна для различения близких аминогликозидных соединений |
| Рефрактометрия | Определение показателя преломления раствора | Характеризует суммарный состав и не позволяет надежно идентифицировать отдельную примесь |
| Высокоэффективная жидкостная хроматография | Инструментальное разделение компонентов в хроматографической колонке | Обладает высокой разделительной способностью, но не является регламентированным методом данного испытания |
Стрептомицин B относится к технологическим родственным примесям, характерным для антибиотиков биологического происхождения. Его контроль необходим для подтверждения воспроизводимости процесса ферментации и последующей очистки фармацевтической субстанции. Тонкослойная хроматография в данном случае выполняет роль предельного испытания: она устанавливает не точную концентрацию, а соответствие содержания примеси допустимому нормативу. Результат признают удовлетворительным только при выполнении требований к разделению пятен и пригодности хроматографической системы.