2) метильных радикалов
3) стероидной структуры
4) пятичленного ненасыщенного лактонного кольца (+)
Сердечные гликозиды состоят из стероидного агликона и углеводного фрагмента; диагностически значимой частью для реакции Легаля является не сахар, а лактонное кольцо при C17 стероидного ядра. Для карденолидов это пятичленное α,β-ненасыщенное γ-лактонное кольцо. Именно его наличие обусловливает положительную реакцию с нитропруссидом натрия в щелочной среде.
В щелочных условиях активируется метиленовый фрагмент, сопряжённый с карбонильной группой ненасыщенного лактонного цикла, после чего образуется окрашенный продукт взаимодействия с нитропруссид-ионом. Появление розовой, красной или красно-фиолетовой окраски расценивают как положительную реакцию Легаля. Таким образом, реакция является групповой качественной пробой на карденолидный тип агликона и не подтверждает непосредственно наличие сахара или стероидного ядра.
Наиболее корректная интерпретация результата возможна в комплексе с другими фармакопейными реакциями и хроматографическими методами. Реакция Легаля особенно характерна для препаратов и лекарственного растительного сырья, содержащих сердечные гликозиды карденолидной природы; для окончательной идентификации конкретного соединения требуются дополнительные диагностические признаки.
| Исследуемый структурный признак | Реакция или метод | Условия проведения | Типичный результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|---|
| Пятичленное α,β-ненасыщенное лактонное кольцо | Реакция Легаля | Нитропруссид натрия и щёлочь | Розовая или красная окраска | Подтверждает карденолидный тип сердечного гликозида |
| α,β-Ненасыщенная лактонная система | Реакция Кедде | 3,5-Динитробензойная кислота в щелочной среде | Фиолетовая или пурпурная окраска | Дополнительное подтверждение наличия ненасыщенного лактонного фрагмента |
| Лактонное кольцо в молекуле | Реакция Балье | Пикриновая кислота и щёлочь | Оранжевая или оранжево-красная окраска | Групповая проба на лактонный цикл сердечных гликозидов |
| Дезоксисахарный остаток | Реакция Келлера—Килиани | Ледяная уксусная кислота, хлорид железа(III), концентрированная серная кислота | Сине-зелёная окраска или кольцо на границе слоёв | Выявляет углеводный фрагмент, особенно 2-дезоксисахара |
| Стероидное ядро | Реакция Либермана—Бурхардта | Уксусный ангидрид и концентрированная серная кислота | Зелёная, сине-зелёная окраска | Подтверждает стероидную природу агликона, но не тип лактонного кольца |
| Шестичленное ненасыщенное лактонное кольцо | Структурная дифференциация буфадиенолидов | Сопоставление с реакциями на карденолиды и инструментальными методами | Реакция Легаля не является типичной подтверждающей пробой | Позволяет отличать буфадиенолиды от карденолидов |
Положительная реакция Легаля указывает прежде всего на наличие карденолидного агликона с ненасыщенным пятичленным лактонным циклом. Отрицательный результат не исключает сердечный гликозид полностью, поскольку он может относиться к буфадиенолидному типу, быть разрушен при подготовке пробы или присутствовать в недостаточной концентрации. Для подтверждения подлинности лекарственного сырья используют сочетание цветных реакций, тонкослойной хроматографии и, при необходимости, высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.