2) преднизолон
3) прогестерон
4) этинилэстрадиол (+)
Этинилэстрадиол способен вступать в реакцию азосочетания благодаря наличию ароматического кольца A с фенольной гидроксильной группой в положении C3. В щелочной среде эта группа превращается в фенолят-ион, который повышает электронную плотность ароматического ядра и активирует его для электрофильного замещения. При взаимодействии с солью диазония образуется окрашенное азосоединение, что используется в качественном и количественном анализе препарата.
Азосочетание протекает преимущественно в свободном орто-положении относительно фенольного гидроксила, поскольку пара-положение в стероидном ядре структурно занято. Метилтестостерон, преднизолон и прогестерон не содержат фенольного ароматического фрагмента: их кольцо A является алициклическим и включает кетонные группы и двойные связи, которые не обеспечивают характерной реакционной способности по отношению к диазониевым солям.
| Соединение | Структурный признак | Способность к азосочетанию | Аналитическое значение |
|---|---|---|---|
| Этинилэстрадиол | Фенольная группа при C3 и ароматическое кольцо A | Выраженная | Образование интенсивно окрашенного азокрасителя |
| Метилтестостерон | Кетогруппа при C3, неароматическое кольцо A | Отсутствует | Идентифицируется преимущественно реакциями на карбонильную группу |
| Преднизолон | Кетогруппа и сопряжённая диеновая система без фенольного ядра | Отсутствует | Характерны спектрофотометрические и карбонильные реакции |
| Прогестерон | Две кетогруппы, отсутствие ароматического кольца | Отсутствует | Определяется реакциями образования гидразонов и оксимов |
| Условие реакции | Щелочная среда и наличие диазониевой соли | Фенолят-ион активно вступает в электрофильное замещение | Появление окраски служит аналитическим признаком |
| Положение замещения | Свободное орто-положение к фенольному гидроксилу | Образуется связь –N=N– с ароматическим ядром | Формируется протяжённая система сопряжения |
Интенсивная окраска продукта обусловлена расширением сопряжённой электронной системы после введения азогруппы. Цвет и оптическая плотность раствора зависят от строения диазониевого реагента, pH среды и концентрации анализируемого вещества. Поэтому реакция может применяться не только для подтверждения подлинности этинилэстрадиола, но и как основа фотометрического определения. Решающее дифференциальное значение имеет сочетание ароматического кольца и свободной фенольной гидроксильной группы.