2) химического
3) качественного
4) биологического
Фотоколориметрия относится к физическим и физико-химическим методам анализа, поскольку при её проведении измеряют объективный физический параметр — ослабление или поглощение светового излучения окрашенным раствором. Интенсивность окраски связывают с содержанием определяемого вещества либо продукта его химической реакции. Измерение выполняют в видимой области спектра с использованием фотоколориметра, а результат выражают количественно по калибровочному графику или относительно стандартного раствора.
Метод основан на зависимости оптической плотности от концентрации вещества, описываемой законом Бугера—Ламберта—Бера: A = ε·l·c, где A — оптическая плотность, ε — молярный коэффициент поглощения, l — длина оптического пути, c — концентрация. В фармацевтическом анализе окрашиваемое соединение может определяться непосредственно или образовываться после добавления реагента. Поэтому химическая реакция часто служит подготовительным этапом, но классификацию метода определяет способ регистрации аналитического сигнала — фотометрическое измерение.
Фотоколориметрию не относят к чисто химическим методам, поскольку итоговый результат получают не только по факту протекания реакции, осадкообразования или титрования, а по измерению светопоглощения прибором. Это также не исключительно качественный метод: при соблюдении условий линейности, выборе аналитической длины волны и использовании стандартов он позволяет установить количественное содержание лекарственного вещества.
| Критерий | Фотоколориметрия | Химические методы | Биологические методы |
|---|---|---|---|
| Природа аналитического сигнала | Оптическая плотность или интенсивность окраски раствора | Объём титранта, масса осадка, изменение кислотности и другие химические показатели | Ответ биологической тест-системы: организма, ткани, клетки или микроорганизма |
| Основной принцип | Поглощение видимого света окрашенным соединением и связь сигнала с концентрацией | Использование стехиометрической химической реакции с последующим расчётом содержания | Оценка специфического биологического эффекта исследуемого вещества |
| Роль химической реакции | Часто образует окрашенный продукт, но измерение выполняется физическим приборным способом | Является центральным этапом определения и непосредственно лежит в основе расчёта | Может быть необходима для подготовки образца, но конечным критерием служит биологический ответ |
| Тип результата | Преимущественно количественный; рассчитывается по градуировке или сравнению со стандартом | Количественный или качественный в зависимости от конкретной методики | Обычно количественная оценка активности, силы действия или эффективности |
| Ключевые условия достоверности | Выбор длины волны, стабильность окраски, прозрачность раствора, соблюдение диапазона закона Бера | Полнота и селективность реакции, точность измерения объёма или массы, отсутствие мешающих примесей | Стандартизация тест-системы, воспроизводимость биологического ответа, контроль условий культивирования или содержания животных |
| Типичная область применения | Определение лекарственных веществ, ионов и продуктов реакций, способных образовывать окрашенные соединения | Кислотно-основное, окислительно-восстановительное, осадительное и комплексонометрическое титрование | Оценка антибиотической активности, токсичности, гормональной или иной фармакологической активности |
Таким образом, классификационным признаком служит не наличие химической реакции, а способ измерения аналитического сигнала. Фотоколориметрический метод сочетает химическое образование окрашенного соединения с физико-химической регистрацией его светопоглощения. При корректной калибровке и контроле матричных помех метод применим для количественного контроля качества лекарственных средств.