2) Романовского – Грама
3) Левенштейна – Йенсена
4) Коха – Покровского
Для выявления кислотоустойчивых микобактерий в мазке применяют окраску по Цилю–Нильсену. Клеточная стенка микобактерий содержит большое количество липидов, прежде всего миколовых кислот, поэтому после обработки карболовым фуксином и прогревания краситель прочно удерживается внутри клеточной стенки и не удаляется кислотно-спиртовым обесцвечивателем. На заключительном этапе фон окрашивают метиленовым синим или другим контрастным красителем.
При микроскопии кислотоустойчивые микобактерии выглядят как тонкие красные или малиново-красные палочки на синем фоне. Метод используется при исследовании мокроты и другого диагностического материала, однако его чувствительность зависит от бактериальной нагрузки, качества забора и приготовления мазка. Отрицательный результат бактериоскопии не исключает туберкулез и требует сопоставления с клиническими данными, молекулярно-генетическими тестами и результатами культурального исследования.
Окраска по Романовскому–Гимзе не обладает достаточной специфичностью для кислотоустойчивых микобактерий, а среда Левенштейна–Йенсена предназначена для культивирования и выделения микобактерий, а не для окрашивания мазка. В современной лабораторной практике также используют флуорохромную окраску аурамином или аурамином–родамином, повышающую производительность скрининговой микроскопии, но классическим методом остается окраска по Цилю–Нильсену.
| Метод или подход | Принцип | Результат и диагностическая роль |
|---|---|---|
| Циля–Нильсена | Карболовый фуксин с прогреванием, последующее кислотно-спиртовое обесцвечивание | Кислотоустойчивые микобактерии — красные палочки на контрастном фоне; основной метод прямой бактериоскопии |
| Флуорохромная окраска | Связывание аураминовых красителей с микобактериальными клетками и исследование в люминесцентном микроскопе | Микобактерии светятся желто-зеленым; метод удобен для массового скрининга и поиска малочисленных объектов |
| Романовского–Гимзы | Окрашивание клеточных структур азур-эозиновыми красителями | Применяется преимущественно для клеточной морфологии и паразитологических исследований; не является специфичным методом выявления кислотоустойчивых микобактерий |
| Левенштейна–Йенсена | Посев материала на плотную яичную питательную среду | Культуральное выделение микобактерий, оценка роста и последующее тестирование лекарственной чувствительности; это не метод окраски мазка |
| Молекулярно-генетическая диагностика | Амплификация ДНК микобактерий, иногда с одновременным выявлением мутаций устойчивости к препаратам | Быстрое подтверждение инфекции и ориентировочная оценка лекарственной устойчивости; не заменяет полноценное культуральное исследование во всех ситуациях |
| Культуральное исследование | Выращивание микобактерий на твердых или жидких питательных системах | Наиболее информативное подтверждение жизнеспособных микобактерий, но результат требует больше времени, чем микроскопия или ПЦР |
Ключевым диагностическим признаком является сохранение красителя после кислотно-спиртовой обработки, что обусловлено особенностями липидного слоя клеточной стенки. Обнаружение кислотоустойчивых палочек подтверждает наличие микобактерий в исследованном материале, но само по себе не всегда позволяет надежно определить вид и лекарственную чувствительность. Для окончательной верификации возбудителя применяют молекулярные и культуральные методы. Таким образом, правильный ответ — окраска мазка по Цилю–Нильсену.