2) кислым этанолом (+)
3) дистиллированной водой
4) щелочами
Кислотоустойчивость — это способность бактериальных клеток сохранять основной красный краситель после обесцвечивания кислым этанолом. Классический метод Циля—Нильсена включает окрашивание карболовым фуксином, обработку кислотно-спиртовым раствором и докрашивание контрастным красителем. Для микобактерий характерно сохранение карболового фуксина благодаря липидно-восковому слою клеточной стенки, содержащему миколовые кислоты.
Именно обработка кислым этанолом служит критерием выявления кислотоустойчивости: большинство обычных бактерий при этом теряют основной краситель, а микобактерии остаются красными или малиновыми, обычно в виде тонких палочек на контрастном фоне. Простое воздействие спирта, дистиллированной воды или щелочи не является стандартным этапом дифференциации кислотоустойчивых микроорганизмов и не позволяет определить данный диагностический признак.
| Объект или метод | Поведение при кислотно-спиртовом обесцвечивании | Микроскопическая характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Микобактерии туберкулёзного комплекса | Сохраняют карболовый фуксин | Тонкие красные палочки на синем или зелёном фоне | Признак кислотоустойчивых бактерий, поддерживающий диагноз микобактериальной инфекции |
| Метод Циля—Нильсена | Обесцвечивание проводится кислотным спиртом | Кислотоустойчивые бактерии окрашены в красный цвет, фон — контрастный | Классический метод световой микроскопии мазка |
| Холодный метод Киньона | Используется концентрированный карболовый фуксин без нагревания | Результат сопоставим с окраской по Цилю—Нильсену | Альтернативный вариант выявления кислотоустойчивых бактерий |
| Флуорохромное окрашивание | Микобактерии удерживают флуорохром после кислотно-спиртовой обработки | Светящиеся жёлто-зелёные палочки в люминесцентном микроскопе | Более высокая чувствительность при скрининге мазков |
| Большинство неспорообразующих бактерий | Теряют основной краситель при обработке кислотным спиртом | Окрашиваются контрастным красителем | Отрицательный признак кислотоустойчивости |
| Nocardia spp. и некоторые родственные микроорганизмы | Могут проявлять слабую или частичную кислотоустойчивость | Неравномерно окрашенные, иногда ветвящиеся элементы | Требуют дифференциации с микобактериями с учётом клиники и дополнительных методов |
Положительный результат окраски указывает на наличие кислотоустойчивых бактерий, но сам по себе не определяет вид микроорганизма и его жизнеспособность. Отрицательная микроскопия не исключает туберкулёз, особенно при малом количестве микобактерий в материале. Для видовой идентификации и подтверждения лекарственной устойчивости применяют культуральные и молекулярно-генетические методы.