2) полимеразной цепной реакции (+)
3) посева на плотную среду
4) посева на жидкую среду
Полимеразная цепная реакция выявляет специфические фрагменты ДНК комплекса Mycobacterium tuberculosis за счёт их многократной амплификации. Даже при крайне низкой концентрации возбудителя исходный генетический материал копируется до количества, достаточного для регистрации анализатором. Поэтому молекулярно-генетические методы обладают высокой аналитической чувствительностью и позволяют обнаруживать микобактерии в малобациллярных образцах, в том числе при отрицательном результате микроскопии.
Дополнительным преимуществом ПЦР является отсутствие необходимости в сохранении жизнеспособности микобактерий: исследование может оставаться информативным при частичном разрушении бактериальных клеток во время транспортировки или обработки материала. Современные автоматизированные тест-системы одновременно подтверждают принадлежность возбудителя к туберкулёзному комплексу и могут выявлять мутации лекарственной устойчивости. Однако обнаружение ДНК не всегда свидетельствует о наличии жизнеспособных микобактерий, поэтому результат оценивают вместе с клиническими, лучевыми и культуральными данными.
| Метод | Выявляемый объект | Чувствительность при малом количестве микобактерий | Основные особенности |
|---|---|---|---|
| Световая микроскопия | Кислотоустойчивые бактерии | Низкая | Требует значительной бактериальной нагрузки; не позволяет достоверно определить вид микобактерий |
| Люминесцентная микроскопия | Кислотоустойчивые бактерии, окрашенные флюорохромами | Выше, чем при световой микроскопии, но ниже молекулярных методов | Ускоряет просмотр препарата и повышает вероятность обнаружения редких бактерий |
| ПЦР | Специфические последовательности ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса | Очень высокая | Амплификация позволяет регистрировать минимальное количество генетического материала |
| Посев на плотную среду | Жизнеспособные микобактерии | Высокая | Позволяет получить культуру и определить лекарственную чувствительность, но требует нескольких недель |
| Посев на жидкую среду | Жизнеспособные микобактерии | Высокая, обычно выше, чем на плотных средах | Обеспечивает более быстрое накопление культуры, однако зависит от жизнеспособности возбудителя |
| Молекулярный тест на устойчивость | ДНК возбудителя и мутации резистентности | Высокая | Позволяет быстро выявлять устойчивость, прежде всего к рифампицину и изониазиду |
ПЦР особенно ценна при исследовании материала с предполагаемой низкой бактериальной нагрузкой, например у детей, пациентов с внелёгочным туберкулёзом или ВИЧ-инфекцией. Отрицательный молекулярный результат не исключает заболевание, если клиническая вероятность остаётся высокой. Культуральное исследование сохраняет значение для подтверждения жизнеспособности возбудителя и расширенного определения лекарственной чувствительности. Наиболее надёжная диагностика достигается при сочетании молекулярных, микробиологических и лучевых методов.