2) антиэритроцитарные антитела (+)
3) антитела к белкам
4) антилейкоцитарные антитела
Непрямая проба Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест (НАТ), выявляет в сыворотке или плазме антитела, способные связываться с антигенами эритроцитов. Наиболее клинически значимы иммуноглобулины класса IgG, направленные против эритроцитарных антигенов систем Rh, Kell, Duffy, Kidd и других. Такие антитела могут быть аллоантителами после гемотрансфузий или беременности либо аутоантителами при аутоиммунных гемолитических анемиях.
При проведении теста исследуемую сыворотку инкубируют с эритроцитами, имеющими известный антигенный состав. Если в сыворотке присутствуют антиэритроцитарные антитела, они фиксируются на поверхности этих клеток. После отмывания несвязавшихся белков добавляют антиглобулиновый реагент, содержащий антитела к человеческому IgG и/или компонентам комплемента; он соединяет сенсибилизированные эритроциты, вызывая агглютинацию. Наличие агглютинации означает положительный результат и свидетельствует о циркулирующих антителах к эритроцитарным антигенам.
НАТ применяется для предтрансфузионного скрининга и идентификации нерегулярных антител, выполнения проб на индивидуальную совместимость, а также для оценки иммунной сенсибилизации беременной и риска гемолитической болезни плода и новорождённого. В отличие от прямой пробы Кумбса, которая обнаруживает иммуноглобулины или комплемент, уже фиксированные на эритроцитах пациента in vivo, непрямой тест исследует свободные антитела в жидкой части крови. Антилейкоцитарные и антитромбоцитарные антитела требуют специализированных методов, использующих соответствующие клеточные мишени.
| Метод или этап | Исследуемый материал | Что выявляет | Основное диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Непрямая проба Кумбса | Сыворотка или плазма пациента | Свободные антиэритроцитарные IgG и/или антитела, активирующие комплемент | Скрининг антител, оценка совместимости, выявление аллоиммунизации |
| Прямая проба Кумбса | Эритроциты пациента | IgG и комплемент, фиксированные на эритроцитах in vivo | Подтверждение иммунного гемолиза, включая аутоиммунную гемолитическую анемию |
| Скрининг антиэритроцитарных антител | Сыворотка пациента и стандартные скрининговые эритроциты | Нерегулярные антитела к клинически значимым антигенам | Первичный этап иммуногематологического обследования перед переливанием |
| Идентификация антител | Сыворотка пациента и панель типированных эритроцитов | Специфичность антитела по характеру реакций с панелью | Определение антигена-мишени и подбор совместимой крови |
| Проба на индивидуальную совместимость | Сыворотка пациента и эритроциты донорского компонента | Реакцию антител пациента с конкретными донорскими эритроцитами | Предотвращение гемолитической трансфузионной реакции |
| Исследование антилейкоцитарных антител | Сыворотка и лейкоциты или антигенные панели HLA | Антитела к лейкоцитарным и HLA-антигенам | Диагностика иммунных осложнений трансфузий и подбор компонентов крови |
| Исследование антитромбоцитарных антител | Сыворотка и тромбоциты или специфические тромбоцитарные антигены | Антитела к тромбоцитарным антигенам | Обследование при иммунной тромбоцитопении и рефрактерности к трансфузиям тромбоцитов |
Положительный НАТ сам по себе не доказывает наличие гемолиза, поскольку отражает иммунологическую сенсибилизацию, а не степень разрушения эритроцитов. Для клинической интерпретации сопоставляют результат с уровнем гемоглобина, ретикулоцитозом, концентрацией непрямого билирубина, лактатдегидрогеназы и гаптоглобина. При выявлении антител необходимо определить их специфичность и клиническую значимость, поскольку это влияет на выбор эритроцитарного компонента для трансфузии. deceleration