2) высокими показателями бокового (SSC) и прямого (FSC)
3) низким значением бокового (SSC) и высоким значением прямого (FSC)
4) высоким значением бокового (SSC) и низким значением прямого (FSC)
В проточной цитометрии прямое светорассеяние (FSC, forward scatter) в основном отражает относительный размер клетки, а боковое светорассеяние (SSC, side scatter) — её внутриклеточную сложность, включая количество гранул и плотность цитоплазматических структур. Зрелые лимфоциты обычно имеют небольшой размер, узкий ободок цитоплазмы и низкую гранулярность, поэтому характеризуются одновременно низкими значениями FSC и SSC.
Моноциты крупнее лимфоцитов, содержат больше цитоплазмы и имеют более сложную внутреннюю структуру, вследствие чего занимают область с промежуточными или повышенными показателями FSC и SSC. Гранулоциты, особенно нейтрофилы и эозинофилы, обладают выраженной зернистостью и сегментированным ядром, что обусловливает наиболее высокое боковое светорассеяние; их прямое светорассеяние также обычно выше, чем у малых лимфоцитов.
Соотношение FSC и SSC используется для первичного выделения лейкоцитарных популяций на скаттерограмме и последующей верификации методом иммунофенотипирования. Низкие FSC и SSC типичны для зоны лимфоцитов, однако не являются самостоятельным признаком конкретной линии: окончательная идентификация проводится с учётом экспрессии CD45, CD3, CD19, CD20, CD56 и других маркеров. Размер клеток и интенсивность рассеяния могут увеличиваться при активации лимфоцитов, бластной трансформации или наличии крупных гранулярных лимфоцитов.
| Клеточная популяция | FSC | SSC | Морфологическая основа | Типичная роль в скаттер-анализе |
|---|---|---|---|---|
| Малые зрелые лимфоциты | Низкий | Низкий | Небольшой размер, узкий ободок цитоплазмы, отсутствие выраженной зернистости | Формируют компактный кластер в нижней левой части FSC/SSC-диаграммы |
| Активированные или крупные лимфоциты | Умеренный или повышенный | Низкий или умеренный | Увеличение объёма цитоплазмы, возможная азурофильная зернистость | Могут частично смещаться из стандартной лимфоцитарной зоны |
| Моноциты | Умеренный или высокий | Умеренный | Крупные клетки с обильной цитоплазмой и внутриклеточными органеллами | Обычно располагаются между лимфоцитами и гранулоцитами |
| Нейтрофилы | Умеренный или высокий | Высокий | Сегментированное ядро и выраженная цитоплазматическая зернистость | Образуют область с наиболее выраженным SSC среди основных лейкоцитов |
| Эозинофилы и базофилы | Умеренный или высокий | Высокий, часто очень высокий | Крупные специфические гранулы различной электронной плотности | Могут отделяться от нейтрофилов по особенностям SSC и дополнительным маркерам |
| Клеточный дебрис и тромбоциты | Очень низкий | Очень низкий | Малый размер и отсутствие сложной внутренней структуры | Располагаются ниже и левее лимфоцитарного кластера; исключаются при анализе лейкоцитов |
Таким образом, сочетание низких FSC и SSC отражает малый размер и низкую внутриклеточную гранулярность зрелых лимфоцитов. Скаттерограмма служит ориентиром для разграничения клеточных популяций, но не заменяет морфологическое исследование и иммунологическое подтверждение. При подозрении на лимфопролиферативное заболевание оценку светорассеяния необходимо сопоставлять с иммунофенотипом и клинико-лабораторными данными.