2) четыре ГФИ-ассоциированных антигена
3) два ГФИ-ассоциированных антигена (+)
4) хотя бы один ГФИ-ассоциированный антиген
Пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ) обусловлена соматической мутацией гена PIGA в гемопоэтической стволовой клетке. В результате нарушается синтез гликозилфосфатидилинозитольного (ГФИ, GPI) якоря, необходимого для фиксации ряда белков на поверхности клеток. ПНГ-клетки теряют ГФИ-связанные белки, включая CD14 на моноцитах, а также связывание с FLAER — флуоресцентным производным аэролизина, которое непосредственно выявляет наличие ГФИ-якоря.
Размер ПНГ-клона среди моноцитов рассчитывают как долю клеток, одновременно не экспрессирующих два независимых ГФИ-зависимых маркера, обычно FLAER и CD14. Такой подход повышает специфичность исследования: отсутствие только одного маркера может быть связано с особенностями экспрессии, техническими факторами или иным фенотипическим отклонением и не является достаточным доказательством ПНГ-клона. Поэтому правильным является критерий отсутствия двух ГФИ-ассоциированных антигенов.
Моноцитарный и гранулоцитарный клоны оценивают методом высокочувствительной проточной цитометрии, поскольку эти клетки сохраняются в циркуляции дольше, чем эритроциты, и меньше зависят от недавней гемотрансфузии или внутрисосудистого гемолиза. Процент ПНГ-положительных клеток отражает размер клона, но не всегда прямо соответствует выраженности гемолиза или клиническому риску тромбозов.
| Клеточная популяция | Основные маркеры | Критерий ПНГ-клетки | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Моноциты | FLAER и CD14 | Отсутствие обоих маркеров | Основной способ количественной оценки ПНГ-клона в моноцитарной популяции |
| Гранулоциты | FLAER и CD24 или CD66b | Отсутствие FLAER и второго ГФИ-связанного маркера | Высокочувствительное определение размера миелоидного ПНГ-клона |
| Эритроциты | CD59, иногда CD55 | Снижение или отсутствие экспрессии ГФИ-связанных белков | Позволяет выявить клетки с частичным или полным дефицитом защитных белков, но результат зависит от трансфузий и гемолиза |
| ПНГ-клетки типа I | Экспрессия ГФИ-связанных белков сохранена | Фенотипически нормальные клетки | Не имеют дефицита ГФИ-якоря и не относятся к патологическому клону |
| ПНГ-клетки типа II | Экспрессия ГФИ-связанных белков снижена | Частичный дефицит маркеров | Соответствуют частичному нарушению синтеза ГФИ-якоря и промежуточной чувствительности к комплементу |
| ПНГ-клетки типа III | ГФИ-связанные белки отсутствуют | Полный дефицит маркеров | Наиболее высокая чувствительность к комплемент-опосредованному лизису |
Для подтверждения ПНГ необходимо выявить клон клеток с дефицитом ГФИ-связанных белков как минимум в одной клеточной линии, предпочтительно с использованием двух независимых маркеров. Исследование моноцитов особенно полезно при малом размере клона и после переливания эритроцитов. Интерпретацию проводят совместно с данными о внутрисосудистом гемолизе, цитопениях, тромбозах и возможной апластической анемии. Отрицательный результат по одному маркеру без подтверждения вторым ГФИ-зависимым показателем недостаточен для диагностики ПНГ.