2) клетками с полной потерей
3) клетками с частичной потерей
4) как сумма всех эритроцитов, если хотя бы на части из них обнаружен дефицит
При проточной цитометрии эритроциты с ПНГ-фенотипом подразделяют на клетки II типа — с частичным дефицитом гликозилфосфатидилинозитол-ассоциированных белков — и клетки III типа, у которых эти белки отсутствуют полностью. Поэтому размер ПНГ-клона в эритроцитарной популяции рассчитывают как суммарную долю клеток обоих патологических типов среди всех исследованных эритроцитов.
В основе заболевания лежит соматическая мутация гена PIGA в гемопоэтической стволовой клетке, нарушающая синтез гликозилфосфатидилинозитольного якоря. В результате на поверхности клеток уменьшается или полностью отсутствует экспрессия GPI-связанных белков, прежде всего ингибиторов комплемента CD55 и CD59. Недостаток этих молекул делает эритроциты чувствительными к комплемент-опосредованному внутрисосудистому гемолизу, причем клетки III типа обычно разрушаются интенсивнее, чем клетки II типа.
Учет только клеток с полной потерей GPI-связанных белков привел бы к занижению размера клона, поскольку эритроциты с частичным дефицитом также происходят из патологического клона и обладают повышенной чувствительностью к комплементу. Одновременно эритроцитарный ПНГ-клон может быть меньше гранулоцитарного из-за селективного гемолиза патологических эритроцитов и влияния предшествующих трансфузий.
| Популяция эритроцитов | Экспрессия GPI-связанных белков | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Эритроциты I типа | Нормальная экспрессия CD55 и CD59 | Не относятся к ПНГ-клону |
| Эритроциты II типа | Частичное снижение экспрессии | Включаются в расчет размера ПНГ-клона |
| Эритроциты III типа | Полное отсутствие экспрессии | Включаются в расчет; наиболее чувствительны к комплементу |
| Расчет эритроцитарного клона | Сумма клеток II и III типов | Выражается в процентах от общего числа эритроцитов |
| Гранулоцитарный ПНГ-клон | Дефицит нескольких GPI-связанных маркеров или отсутствие связывания FLAER | Часто точнее отражает истинный размер клона |
| Влияние гемолиза | Преимущественное разрушение клеток III типа | Может занижать долю ПНГ-эритроцитов |
| Влияние трансфузий | Поступление донорских эритроцитов с нормальным фенотипом | Уменьшает измеряемую долю эритроцитарного клона |
Для подтверждения ПНГ рекомендуется исследовать не менее двух независимых GPI-связанных маркеров в нескольких клеточных линиях. Наиболее информативным считается анализ гранулоцитов и моноцитов, поскольку эти клетки не подвергаются трансфузионному замещению и менее значительно утрачиваются вследствие комплемент-опосредованного лизиса. Размер клона следует интерпретировать совместно с показателями гемолиза, клиническими проявлениями, наличием цитопений и тромботических осложнений.