2) эмаль зуба
3) тромбоциты
4) пятна высохшей крови (+)
Пятна высохшей крови пригодны для ДНК-диагностики, поскольку в цельной крови присутствуют лейкоциты — клетки, содержащие ядра и геномную ДНК. После высушивания на специальном фильтровальном бланке ДНК сохраняется достаточно стабильно для выделения и последующего проведения полимеразной цепной реакции, анализа коротких тандемных повторов, MLPA, секвенирования отдельных генов и панелей наследственных заболеваний. Такой материал особенно широко используется в неонатальном скрининге и при транспортировке образцов на большие расстояния.
Диагностическая ценность определяется не эритроцитами как таковыми, а ядерными клетками крови, прежде всего лейкоцитами. Зрелые эритроциты человека и тромбоциты не имеют ядра, поэтому не являются источником достаточного количества ядерной ДНК; эмаль зуба представляет собой минерализованную, практически бесклеточную ткань. При исследовании высохшей крови учитывают объем пятна, качество пропитывания бланка, срок и условия хранения, а при сомнительном или клинически значимом результате возможно подтверждение анализа в свежей венозной крови.
| Материал | Клеточная или тканевая основа | Возможность выделения ДНК | Практическое применение |
|---|---|---|---|
| Пятно высохшей цельной крови | Лейкоциты с ядрами в составе крови | Да, обычно достаточна для молекулярно-генетических методов | Неонатальный скрининг, ПЦР, генотипирование, секвенирование |
| Свежая венозная кровь | Преимущественно ядерные клетки лейкоцитарного ряда | Да, является стандартным источником геномной ДНК | Подтверждающая диагностика, исследование вариантов генов и хромосомных нарушений |
| Эритроциты | Зрелые безъядерные клетки | Практически нет ядерной ДНК | Самостоятельно не используются как материал для стандартной ДНК-диагностики |
| Тромбоциты | Безъядерные фрагменты мегакариоцитов | Недостаточна для рутинного анализа ядерного генома | Не являются стандартным источником геномной ДНК |
| Эмаль зуба | Высокоминерализованная бесклеточная ткань | Собственной ядерной ДНК практически не содержит | Не используется как самостоятельный материал для обычной ДНК-диагностики |
| Буккальный эпителий | Ядросодержащие эпителиальные клетки слюны | Да, при достаточном количестве клеточного материала | Неинвазивное генотипирование и некоторые наследственные исследования |
Для получения достоверного результата важны правильный забор крови, полное высушивание образца и предотвращение контаминации чужой ДНК. В высохших пятнах может сохраняться не только ядерная, но и митохондриальная ДНК, однако большинство рутинных тестов направлено на анализ ядерного генома. При низком количестве материала или подозрении на мозаицизм исследование целесообразно повторить из дополнительного образца. Таким образом, пятно высохшей крови является удобным и валидированным материалом для ДНК-диагностики благодаря наличию в нем лейкоцитов.