2) секвенирование по Сенгеру отдельных генов
3) секвенирование экзома (+)
4) хромосомный микроматричный анализ
Аксональные наследственные моторно-сенсорные нейропатии, преимущественно относимые к группе болезни Шарко—Мари—Тута типа 2, отличаются выраженной генетической гетерогенностью. Сходный клинико-электрофизиологический фенотип может быть обусловлен патогенными вариантами во множестве ядерных генов, включая MFN2, MPZ, GJB1, GDAP1, NEFL, HSPB1 и SORD. Поэтому последовательное исследование отдельных генов имеет низкую эффективность, тогда как секвенирование экзома позволяет одновременно анализировать кодирующие области тысяч генов и выявлять однонуклеотидные варианты и малые вставки или делеции.
Нейрофизиологическим признаком аксонального варианта служит преимущественное снижение амплитуд моторных и сенсорных ответов, отражающее потерю аксонов, при относительно сохранной или умеренно сниженной скорости проведения импульса. Для CMT2 обычно характерны дистальная мышечная слабость и атрофия, снижение сухожильных рефлексов, деформации стоп и чувствительные нарушения. Поскольку по клинической картине часто невозможно надежно определить конкретный причинный ген, широкое параллельное исследование генов обеспечивает более высокую диагностическую результативность, чем выбор одного предполагаемого гена.
Анализ митохондриальной ДНК оправдан преимущественно при признаках митохондриального заболевания, однако многие белки, участвующие в энергетическом обмене и динамике митохондрий, кодируются ядерными генами; например, частая причина CMT2A связана с геном MFN2. Хромосомный микроматричный анализ ориентирован на крупные делеции и дупликации и особенно значим для выявления изменения числа копий PMP22 при демиелинизирующей CMT1A или наследственной нейропатии со склонностью к параличам от сдавления. Большинство причин аксональных форм представлено небольшими последовательностными вариантами, которые микроматричный анализ не обнаруживает.
| Диагностический подход | Основные выявляемые изменения | Значение при аксональной нейропатии | Ключевые ограничения |
|---|---|---|---|
| Секвенирование экзома | Однонуклеотидные варианты и малые вставки/делеции в кодирующих областях множества генов | Наиболее эффективно среди перечисленных методов при генетически гетерогенном фенотипе | Может не выявлять глубокие интронные варианты, повторные экспансии и часть структурных перестроек |
| Таргетная NGS-панель | Варианты в заранее сформированном наборе генов нейропатий | Обладает высокой глубиной покрытия и может применяться как этап диагностического алгоритма | Не обнаруживает изменения в генах, не включенных в панель |
| Секвенирование по Сенгеру | Небольшие варианты в выбранном гене или участке | Подходит для подтверждения найденного варианта и семейного исследования | Малоэффективно для первичного поиска при отсутствии четкой ген-клинической гипотезы |
| Хромосомный микроматричный анализ | Крупные делеции и дупликации геномных участков | Полезен при подозрении на протяженные изменения числа копий | Не выявляет большинство точечных вариантов, вызывающих CMT2 |
| Исследование PMP22 | Дупликация или делеция участка 17p11.2 | Приоритетно при демиелинизирующем типе или эпизодах компрессионных мононейропатий | Обычно не объясняет типичный аксональный фенотип |
| Анализ митохондриальной ДНК | Патогенные варианты и крупные перестройки митохондриального генома | Показан при сочетании нейропатии с миопатией, офтальмоплегией, тугоухостью или другими признаками митохондриальной патологии | Не охватывает многочисленные ядерные гены, связанные с аксональной дегенерацией |
| Секвенирование генома | Кодирующие, некодирующие и многие структурные варианты | Может повышать диагностическую результативность после отрицательного экзомного исследования | Требует более сложной интерпретации и не всегда доступно как первичный тест |
Выявленный при секвенировании вариант должен оцениваться с учетом типа наследования, частоты в популяции, соответствия фенотипу и критериев патогенности. Варианты неопределенного клинического значения сами по себе не подтверждают диагноз; для их уточнения могут потребоваться сегрегационный анализ в семье, функциональные данные и повторная интерпретация. При отрицательном результате экзомного исследования следует учитывать структурные варианты, повторные экспансии, некодирующие изменения и приобретенные причины полинейропатии. Секвенирование генома и периодический реанализ данных способны дополнительно повысить частоту молекулярной верификации.