2) хромосомного мозаицизма
3) анеуплоидий по всем хромосомам набора
4) анеуплоидий по хромосомам 13, 18, 21, X и Y (+)
Интерфазный FISH-анализ основан на гибридизации флуоресцентно меченых ДНК-зондов с определёнными участками хромосом в ядрах клеток эмбриона. Подсчёт флуоресцентных сигналов позволяет выявлять избыток или недостаток копий хромосом 13, 18, 21, X и Y и отбирать эмбрионы без наиболее частых числовых нарушений: трисомий 13, 18, 21, а также аномалий половых хромосом. Поэтому правильным является вариант, указывающий на анеуплоидии именно этой ограниченной панели хромосом.
Метод не обеспечивает полноценного анализа всего хромосомного набора: для этого применяются современные варианты PGT-A на основе сравнительной геномной гибридизации или секвенирования нового поколения. Сбалансированные транслокации и инверсии не сопровождаются изменением числа копий генетического материала и обычно не выявляются стандартной FISH-панелью. Мозаицизм также может быть пропущен, поскольку исследуются ограниченное число клеток, а результаты отражают только состояние взятого клеточного материала.
Диагностическая ценность FISH определяется составом использованных зондов и числом исследованных ядер. Нормальным результатом для аутосом обычно считается наличие двух сигналов, а для половых хромосом — два сигнала X у эмбриона XX или по одному сигналу X и Y у эмбриона XY. Отклонение числа сигналов указывает на вероятную анеуплоидию и является основанием для исключения такого эмбриона из переноса.
| Объект анализа | Что оценивает FISH | Типичный диагностический результат | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Хромосома 13 | Число копий специфического участка | Выявление трисомии 13, связанной с синдромом Патау | Не выявляет нарушения других хромосом и большинство структурных дефектов |
| Хромосома 18 | Количество флуоресцентных сигналов | Выявление трисомии 18, соответствующей синдрому Эдвардса | Результат относится только к исследованным клеткам и выбранному локусу |
| Хромосома 21 | Числовой дисбаланс хромосомы | Выявление трисомии 21, лежащей в основе синдрома Дауна | Не исключает мозаицизм во всём эмбрионе при анализе ограниченного числа клеток |
| Хромосомы X и Y | Число копий половых хромосом и наличие Y-сигнала | Выявление вариантов 45,X; 47,XXY; 47,XXX; 47,XYY и других числовых аномалий | Не заменяет полноценное исследование кариотипа и не оценивает все варианты дисбаланса |
| Сбалансированные перестройки | Стандартная панель обычно не оценивает взаимное расположение хромосом | Нормальное число сигналов возможно при транслокации или инверсии | Требуются кариотипирование родителей, таргетная FISH или специализированное PGT-SR |
| Хромосомный мозаицизм | Сравнение числа сигналов в отдельных исследованных ядрах | Мозаичный состав может быть заподозрен при различающихся паттернах сигналов | Низкоуровневый или ограниченный мозаицизм может остаться невыявленным |
| Анеуплоидии остальных хромосом | Не входят в стандартную пятихромосомную панель | Нормальный FISH-результат не означает эуплоидность всего генома | Для широкого скрининга необходимы PGT-A методом NGS или полный хромосомный анализ |
Таким образом, интерфазный FISH в классическом варианте является таргетным методом, а не универсальным исследованием кариотипа эмбриона. Его применение позволяет отбраковывать эмбрионы с наиболее частыми анеуплоидиями хромосом 13, 18, 21, X и Y. Отрицательный результат снижает вероятность соответствующих нарушений, но не исключает аномалии других хромосом, сбалансированные перестройки и все формы мозаицизма. Выбор метода PGT должен соответствовать предполагаемому генетическому риску и цели обследования.