2) Д.Уотсон
3) Ф. Сэнгер (+)
4) Ф.Крик
Правильный ответ — Ф. Сэнгер. В 1977 году Фредерик Сэнгер разработал ферментативный метод секвенирования ДНК, известный как метод обрыва цепи или дидезокси-метод. Его принцип заключается в синтезе комплементарной цепи ДНК с использованием матрицы, праймера, ДНК-полимеразы и смеси обычных дезоксинуклеотидтрифосфатов с дидезоксинуклеотидами.
Дидезоксинуклеотиды не имеют 3′-гидроксильной группы, необходимой для присоединения следующего нуклеотида, поэтому их включение приводит к прекращению синтеза цепи. Образуется набор фрагментов различной длины, заканчивающихся определённым нуклеотидом; после разделения фрагментов электрофорезом и регистрации флуоресцентных меток восстанавливается последовательность ДНК. Современная автоматизированная версия метода применяется для подтверждения вариантов, выявленных при массовом параллельном секвенировании, а также для анализа отдельных генов и небольших участков генома.
| Метод | Основной принцип | Характеристика и область применения |
|---|---|---|
| Секвенирование по Сэнгеру | Обрыв синтеза цепи при включении флуоресцентно меченого дидезоксинуклеотида | Высокая точность; обычно анализируют один амплифицированный фрагмент длиной до примерно 700–1000 пар оснований |
| Метод Максама—Гилберта | Химическая модификация и избирательное расщепление ДНК | Исторический метод первого поколения, практически вытеснен ферментативным секвенированием |
| Секвенирование Illumina | Синтез с обратимым терминатором и массовая регистрация флуоресцентных сигналов | Массовое параллельное секвенирование коротких прочтений; используется для поиска множества вариантов |
| Пиросеквенирование | Регистрация пирофосфата, высвобождаемого при присоединении нуклеотида | Быстрый анализ относительно коротких последовательностей, но ограниченная точность в гомополимерных участках |
| PacBio HiFi | Многократное считывание одной молекулы в режиме реального времени | Длинные высокоточные прочтения; полезно для структурных вариантов и сборки генома |
| Oxford Nanopore | Измерение изменения электрического тока при прохождении ДНК через нанопору | Очень длинные прочтения и возможность портативного анализа; точность зависит от платформы и алгоритмов обработки |
Метод Сэнгера относится к секвенированию первого поколения и сохраняет значение благодаря высокой аналитической точности. В медицинской генетике его часто используют для верификации патогенного варианта и уточнения последовательности после ПЦР. Ограничением метода являются невысокая пропускная способность и невозможность экономично исследовать большие объёмы генетического материала.