2) мультицветной флуоресцентной in situ гибридизацией (mFISH)
3) флуоресцентной in situ гибридизацией (FISH) с субтеломерными ДНК-зондами
4) флуоресцентной in situ гибридизацией (FISH) с локус-специфичными ДНК-зондами (+)
Синдром Прадера—Вилли обусловлен отсутствием экспрессии импринтированных генов отцовского участка 15q11–q13. Наиболее частый механизм — интерстициальная делеция этого региона на отцовской хромосоме 15; реже выявляются материнская однородительская дисомия 15-й хромосомы или дефект геномного импринтинга. Для обнаружения именно делеции применяют FISH с локус-специфичной ДНК-пробой, например направленной на область SNRPN или другой участок критического региона 15q11–q13.
При наличии делеции на одной из гомологичных хромосом сигнал от локус-специфичной пробы отсутствует, тогда как контрольный сигнал на неповрежденной хромосоме сохраняется. Такой результат подтверждает микроделецию исследуемого участка, но сам по себе не устанавливает родительское происхождение хромосомы и не исключает другие механизмы синдрома. Поэтому в современной диагностике первичным тестом обычно служит анализ метилирования 15q11–q13, а FISH, хромосомный микроматричный анализ или MLPA используются для уточнения структурного варианта.
Центромеро-специфичные зонды выявляют центромерные области и не подходят для оценки интерстициальной микроделеции 15q11–q13. Метод mFISH предназначен преимущественно для одновременной идентификации хромосом и крупных структурных перестроек, а субтеломерные зонды — для терминальных делеций, расположенных вблизи теломеры; критический регион синдрома Прадера—Вилли находится значительно проксимальнее теломеры.
| Метод или признак | Что исследует | Значение при синдроме Прадера—Вилли |
|---|---|---|
| FISH с локус-специфичной пробой | Конкретный участок 15q11–q13, включая SNRPN | Выявляет отсутствие сигнала при интерстициальной микроделеции; правильный ответ |
| Центромеро-специфичная FISH-проба | Центромеру хромосомы 15 | Подтверждает наличие или число хромосом 15, но не выявляет делецию критического региона |
| mFISH | Полный набор хромосом с помощью многоцветного окрашивания | Полезна для крупных перестроек и маркерных хромосом, недостаточно специфична для небольшой делеции 15q11–q13 |
| FISH с субтеломерной пробой | Терминальный участок длинного или короткого плеча хромосомы | Не предназначена для обнаружения интерстициальной делеции в области 15q11–q13 |
| Анализ метилирования 15q11–q13 | Паттерн импринтинга и экспрессию родительских аллелей | Основной скрининговый тест: выявляет синдром при делеции, материнской UPD или дефекте импринтинга |
| Хромосомный микроматричный анализ | Копийные изменения по всему геному | Определяет размер и границы делеции, включая варианты I и II типа |
| Материнская однородительская дисомия 15 | Происхождение обеих хромосом 15 от матери | Вызывает синдром без делеции; FISH с локус-специфичной пробой может быть нормальной |
Генетическое подтверждение синдрома должно учитывать как нарушение метилирования, так и механизм его возникновения. При делеции важно определить ее размер и родительское происхождение, поскольку клиническое консультирование и оценка риска рецидива зависят от молекулярного варианта. Отсутствие делеции при положительном анализе метилирования направляет исследование на UPD и дефект центра импринтинга. Клинически диагноз поддерживают гипотония и трудности сосания в неонатальном периоде, а позднее — гиперфагия, ожирение, задержка психомоторного развития и гипогонадизм.