2) детекции внутрихромосомных инверсий (+)
3) диагностики несбалансированных транслокаций
4) диагностики сбалансированных транслокаций
Обоснование правильного ответа
Спектральное кариотипирование (SKY, spectral karyotyping) основано на окрашивании каждой хромосомы уникальной комбинацией флуорохромов. Метод позволяет установить происхождение участков хромосом и поэтому хорошо выявляет межхромосомные перестройки: реципрокные и сложные транслокации, а также многие несбалансированные варианты, если размер перемещённого материала превышает разрешающую способность метода.
При внутрихромосомной инверсии участок той же хромосомы разворачивается на 180°, но сохраняет исходный набор хромосомного материала и окрашивается тем же спектральным цветом. SKY не оценивает порядок и ориентацию последовательностей внутри одной хромосомы, поэтому инверсия не формирует характерного перехода между участками разного цвета и обычно остаётся нераспознанной. Для её подтверждения применяют анализ метафазных хромосом с высоким разрешением, FISH с зондами на область предполагаемых точек разрыва или методы молекулярного секвенирования.
Робертсоновские транслокации и межхромосомные транслокации могут быть обнаружены SKY, поскольку в производной хромосоме выявляется сочетание материала двух разных хромосом. Несбалансированные перестройки также могут визуализироваться при наличии достаточно крупных делеций, дупликаций или транслокационных фрагментов, хотя для точной оценки дисбаланса предпочтительны хромосомный микроматричный анализ и секвенирование.
| Тип перестройки или задачи | Возможности SKY | Диагностический принцип и ограничения |
|---|---|---|
| Сбалансированная реципрокная транслокация | Обычно выявляется | Производная хромосома содержит участки с разными спектральными метками; количественная потеря материала отсутствует. |
| Несбалансированная транслокация | Выявляется при достаточном размере перестроенного участка | Определяются чужеродные хромосомные сегменты и возможная потеря или избыток материала; мелкие изменения могут быть пропущены. |
| Робертсоновская транслокация | Как правило, диагностируется | Слияние длинных плеч двух акроцентрических хромосом формирует производную хромосому с участками разных цветов; короткие плечи обычно утрачены. |
| Внутрихромосомная инверсия | Надёжно не определяется | Инвертированный участок сохраняет цвет соответствующей хромосомы; изменение ориентации и порядка последовательностей метод не показывает. |
| Крупная делеция или дупликация | Может быть заподозрена | Изменение заметно при достаточной протяжённости, но SKY не является оптимальным методом количественной оценки копийности. |
| Микроделеция, микродупликация или точечный вариант | Обычно не выявляется | Размер изменения меньше цитогенетического разрешения; необходимы FISH, хромосомный микроматричный анализ или секвенирование. |
| Сложная перестройка с участием нескольких хромосом | Часто выявляется | Многоцветная маркировка помогает установить происхождение фрагментов, но точные точки разрыва требуют дополнительных молекулярных методов. |
Таким образом, ключевое ограничение SKY связано не с межхромосомным обменом материалом, а с невозможностью оценить внутреннюю архитектуру одной хромосомы. Особенно трудно обнаруживать сбалансированные инверсии, поскольку они не сопровождаются изменением числа копий или появлением чужого спектрального сигнала. Отрицательный результат SKY не исключает такую перестройку при наличии клинических или цитогенетических признаков. Выбор подтверждающего метода определяется предполагаемым размером перестройки и локализацией точек разрыва.