2) центромеро-специфичного ДНК зонда
3) хромосомной микродиссекции
4) мультицветной FISH
Преимплантационная генетическая диагностика трисомии 21 может выполняться методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) на интерфазных ядрах бластомеров. Уникальный локус-специфичный ДНК-зонд содержит флуоресцентно меченную последовательность, комплементарную специфическому участку хромосомы 21. После денатурации ДНК зонд гибридизуется с соответствующими участками, а число флуоресцентных сигналов отражает число копий хромосомы, содержащих данный локус.
В норме в ядре выявляются два сигнала, соответствующие двум гомологичным хромосомам 21, тогда как три отдельных сигнала являются критерием предполагаемой трисомии 21. Такой результат связан с нерасхождением хромосом в мейозе либо, реже, с постзиготическим митотическим нарушением; клинически полная трисомия 21 обусловливает синдром Дауна. Локус-специфичный зонд позволяет проводить адресное исследование именно хромосомы 21, что особенно важно при анализе небольшого числа клеток эмбриона.
Центромерные зонды, мультицветная FISH и методы сравнительной геномной оценки также могут использоваться в лабораторной практике для выявления анеуплоидий, но представляют иные варианты зондирования или расширенного анализа. Хромосомная микродиссекция является методом выделения участков хромосом и сама по себе не обеспечивает непосредственного подсчёта копий в ядре. Интерпретация результата требует учёта качества гибридизации, перекрывания сигналов и возможного эмбрионального мозаицизма, поэтому исследуют информативные ядра по валидированной лабораторной методике.
| Результат FISH-анализа | Количество сигналов локус-специфичного зонда 21 | Диагностическая интерпретация |
|---|---|---|
| Эуплоидный набор | 2 сигнала в информативном ядре | Соответствует двум копиям хромосомы 21 |
| Предполагаемая трисомия 21 | 3 самостоятельных сигнала | Признак наличия дополнительной копии хромосомы 21 |
| Предполагаемая моносомия 21 | 1 сигнал | Возможна потеря одной хромосомы; результат требует контроля качества и подтверждения |
| Мозаицизм | В одних ядрах 2, в других 3 сигнала | Возможна смесь эуплоидного и трисомного клеточных клонов |
| Неинформативное ядро | Сигналы отсутствуют, слабые или неразделимые | Нельзя диагностировать анеуплоидию; требуется повторная оценка или другой метод |
| Центромерное зондирование | Сигнал маркирует центромерную область | Может применяться для подсчёта хромосом, но отличается от адресного уникального локус-специфичного анализа |
| Мультицветная FISH | Несколько цветов для разных хромосом или локусов | Расширяет спектр исследуемых анеуплоидий, но не обязательна для изолированного анализа хромосомы 21 |
Положительный результат FISH указывает на вероятную трисомию 21 в исследованном бластомере, но не всегда полностью характеризует весь эмбрион из-за мозаицизма и ограниченного числа анализируемых клеток. В современной практике результаты преимплантационного тестирования при необходимости подтверждают методами количественной ПЦР, микроматричного анализа или секвенирования нового поколения. После наступления беременности рекомендовано подтверждающее пренатальное обследование, поскольку преимплантационный результат не заменяет пренатальную диагностику.