2) 11; одной культуры клеток
3) по 11; двух независимых культур или разных ворсин
4) 30; одной культуры клеток
При стандартном пренатальном конститутивном кариотипировании исследуют по 5 метафазных пластинок из двух независимо заложенных культур клеток либо из разных ворсин хориона. Такой дизайн дает суммарно не менее 10 оцененных клеток и одновременно обеспечивает биологическую независимость исследуемого материала. Каждая метафазная пластинка позволяет провести попарное сравнение гомологичных хромосом, выявить анеуплоидии и крупные структурные перестройки, различимые при используемом уровне дифференциального окрашивания.
Принцип двух независимых культур важнее простого увеличения числа клеток в одной культуре. При культивировании возможны селективный рост отдельных клеточных линий, возникновение артефактной хромосомной аномалии in vitro и формирование псевдомозаицизма — обнаружения измененного клона, не отражающего кариотип плода. В образцах ворсин хориона дополнительное значение имеют ограниченный плацентарный мозаицизм и различия между клеточными линиями цитотрофобласта и мезенхимы; поэтому современные рекомендации также предусматривают независимую постановку и анализ пренатальных культур.
Исследование 11 или 30 метафаз из одной культуры повышает число наблюдений, но не устраняет общий культуральный источник ошибки. Напротив, анализ по 11 клеток из каждой культуры для рутинного исследования избыточен и обычно требуется при подозрении на мозаицизм или при выявлении единичной аномальной клетки. При специальном поиске мозаицизма объем анализа расширяют по отдельному протоколу; например, актуальные рекомендации предусматривают исследование не менее 10 клеток из каждой из двух независимых культур.
| Цитогенетическая ситуация | Распределение находки | Диагностическая интерпретация и действия |
|---|---|---|
| Рутинный анализ без отклонений | Одинаковый нормальный кариотип в метафазах обеих культур | Результат расценивают как конститутивный кариотип исследованного материала с учетом разрешающей способности метода |
| Истинная хромосомная аномалия | Одинаковое изменение выявлено в нескольких клетках двух независимых культур | Высока вероятность, что аномалия присутствует in vivo; необходимы клиническая интерпретация и генетическое консультирование |
| Единичная аномальная клетка | Изменение обнаружено в одной метафазе одной культуры | Возможны технический артефакт или псевдомозаицизм; анализ расширяют и оценивают вторую культуру |
| Клон только в одной культуре | Несколько однотипных аномальных клеток присутствуют в одной культуре, но отсутствуют в другой | Следует исключать культурально-индуцированный клон; показаны дополнительные клетки, культуры и подтверждающие методы |
| Подозрение на истинный мозаицизм | Аномальная линия выявляется в независимых культурах или разных колониях | Проводят расширенный подсчет клеток и при необходимости FISH, QF-PCR, хромосомный микроматричный анализ либо исследование другого материала |
| Ограниченный плацентарный мозаицизм | Аномалия обнаружена в ворсинах хориона, но может отсутствовать в клетках плода | Рассматривают подтверждение по амниоцитам и сопоставляют результат с ультразвуковыми и молекулярными данными |
| Материнская клеточная контаминация | Преобладает женский кариотип, особенно при наличии децидуальной ткани или крови | Происхождение клеток уточняют генотипированием STR-маркеров или QF-PCR с образцом матери |
Стандартный объем анализа рассчитан на надежное установление основного кариотипа, но не гарантирует исключения низкоуровневого мозаицизма. При ультразвуковых аномалиях, расхождении результатов разных методов или обнаружении необычной клетки исследование должно быть расширено. Кариотипирование выявляет численные нарушения и достаточно крупные структурные перестройки, тогда как субмикроскопические делеции и дупликации требуют молекулярно-цитогенетических методов. Окончательное заключение формируют с учетом типа пренатального материала, качества метафаз и риска материнской контаминации.