2) микродупликации в длинных или коротких плечах хромосом с применением многоцветного окрашивания
3) численных и структурных хромосомных аномалий, анеуплоидий в перинатальных клетках, идентификации маркерных хромосом (+)
4) сбалансированных структурных перестроек только в интерфазных ядрах
Правильный ответ — 3. FISH (fluoresцентная гибридизация in situ) основан на связывании флуоресцентно меченых ДНК-зондов с комплементарными последовательностями хромосом. Число и расположение сигналов в интерфазных ядрах или на метафазных хромосомах позволяют выявлять избыток или недостаток хромосомного материала, отдельные структурные перестройки, а также идентифицировать маркерные хромосомы.
В перинатальной диагностике метод применяют к амниоцитам, клеткам хориона или другим клеткам плода для быстрой оценки наиболее частых анеуплоидий — трисомий 13, 18, 21 и нарушений числа половых хромосом. Центромерные, локус-специфичные, subtelомерные и break-apart-зонды позволяют установить наличие конкретного участка, его делецию или дупликацию, транслокацию либо участие исследуемой хромосомы в маркерной структуре. Анализ интерфазных ядер не требует предварительного культивирования клеток и обеспечивает быстрый результат, однако исследование является целевым и зависит от набора использованных зондов.
Другие формулировки неточны. Инверсии и микродупликации действительно могут быть обнаружены методом FISH при наличии специально подобранных зондов, но это не универсальная характеристика метода и не обязательно требует многоцветного окрашивания. FISH выявляет не только сбалансированные перестройки и применяется как в интерфазных ядрах, так и на метафазных хромосомах; кроме того, он используется для диагностики численных и несбалансированных структурных нарушений.
| Исследуемый объект | Тип FISH-зонда | Диагностический признак | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Анеуплоидия | Центромерные или локус-специфичные зонды | Изменение числа флуоресцентных сигналов в ядре | Быстрое выявление наиболее частых трисомий и нарушений числа половых хромосом |
| Делеция определённого участка | Локус-специфичный зонд и контрольный зонд | Отсутствие одного сигнала при сохранении контрольного | Подтверждение известного микроделеционного синдрома |
| Микродупликация | Локус-специфичный зонд | Три сигнала вместо двух или увеличение сигнального материала | Выявление заранее предполагаемой дупликации; метод не заменяет полногеномный поиск |
| Транслокация | Dual-fusion или break-apart-зонды | Слияние сигналов либо их разделение и изменение локализации | Диагностика отдельных сбалансированных и несбалансированных перестроек |
| Маркерная хромосома | Центромерные, хромосомоспецифичные и локусные зонды | Определение происхождения дополнительного фрагмента хромосомы | Уточнение клинической значимости сверхчисленной маркерной хромосомы |
| Инверсия | Break-apart-зонды по предполагаемым точкам разрыва | Изменение взаимного расположения сигналов | Возможна targeted-диагностика, но чувствительность зависит от локализации разрывов и конструкции зондов |
FISH особенно эффективен при клиническом подозрении на конкретную хромосомную патологию и необходимости быстрого результата. Он может выполняться на некультивированных интерфазных клетках, а также на метафазных препаратах для анализа положения сигналов относительно хромосом. Отрицательный результат исключает только те нарушения, для поиска которых были использованы соответствующие зонды. При необходимости полного анализа генома FISH дополняют кариотипированием, хромосомным микроматричным анализом или секвенированием.