2) биохимический анализ крови
3) микроскопия крови
4) проточная цитометрия (+)
Проточная цитометрия является стандартным методом лабораторного подтверждения клона пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ), поскольку позволяет непосредственно выявлять клетки с дефицитом гликозилфосфатидилинозитол-связанных (GPI-связанных) белков. ПНГ возникает вследствие приобретённой соматической мутации гена PIGA в гемопоэтической стволовой клетке, что нарушает синтез GPI-якоря. В результате на поверхности клеток крови отсутствуют или резко снижены GPI-связанные белки, в том числе CD55 и CD59, защищающие клетки от комплемент-опосредованного повреждения.
При высокочувствительной проточной цитометрии исследуют прежде всего гранулоциты и моноциты, определяя экспрессию GPI-связанных антигенов и связывание FLAER — флуоресцентно меченного аэролизина, взаимодействующего непосредственно с GPI-якорем. Выявление популяции клеток с отсутствующей или резко сниженной экспрессией соответствующих маркеров подтверждает наличие ПНГ-клона и позволяет количественно оценить его размер. Анализ эритроцитов по CD55/CD59 также применяется, однако размер эритроцитарного клона может быть занижен вследствие внутрисосудистого гемолиза или предшествующих гемотрансфузий.
Исследование костного мозга необходимо для оценки сопутствующей аплазии, миелодисплазии и других нарушений гемопоэза, но само по себе не подтверждает ПНГ-клон. Биохимические признаки гемолиза — повышение активности ЛДГ, снижение гаптоглобина, увеличение непрямого билирубина — отражают последствия заболевания, а микроскопия периферической крови не выявляет специфических морфологических признаков ПНГ.
| Метод или показатель | Диагностическое значение при ПНГ |
|---|---|
| Проточная цитометрия гранулоцитов | Высокочувствительное выявление клеток с дефицитом GPI-связанных белков; используется для подтверждения и количественной оценки ПНГ-клона. |
| Проточная цитометрия моноцитов | Позволяет независимо подтвердить наличие патологического клона и повышает надёжность диагностики. |
| FLAER | Связывается с GPI-якорем; снижение или отсутствие связывания указывает на GPI-дефицитные клетки. |
| CD55 и CD59 на эритроцитах | Снижение или отсутствие экспрессии характерно для ПНГ, однако результат может зависеть от гемолиза и переливаний крови. |
| Биохимические маркеры гемолиза | Повышение ЛДГ и непрямого билирубина, снижение гаптоглобина поддерживают диагноз внутрисосудистого гемолиза, но не доказывают наличие ПНГ-клона. |
| Исследование костного мозга | Оценивает клеточность и сопутствующие заболевания костного мозга, особенно апластическую анемию и миелодиспластические процессы. |
| Микроскопия периферической крови | Не имеет специфических морфологических признаков, позволяющих достоверно идентифицировать ПНГ-клон. |
Диагностически значимым является обнаружение характерной GPI-дефицитной популяции как минимум в двух клеточных линиях с использованием нескольких независимых маркеров. Современные высокочувствительные панели способны выявлять очень малые ПНГ-клоны, что особенно важно при апластической анемии и некоторых миелодиспластических состояниях. Размер клона оценивают в динамике, поскольку он может изменяться под влиянием естественного течения заболевания и проводимой терапии. Таким образом, проточная цитометрия одновременно подтверждает наличие патологического клона и обеспечивает его количественный мониторинг.